一、厄贝沙坦对大鼠血管平滑肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响（论文文献综述）
袁晶[1]（2021）在《绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究》文中进行了进一步梳理目的:1.评价补肾法联合降压药治疗女性绝经后及围绝经期高血压的有效性和安全性。2.探讨绝经后高血压患者的中医证型分布及动态血压特点。3.探讨淫羊藿苷（icariin,ICA）对雌性去势SHR循环和心肌组织肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）的调节作用及相关机制。方法:1.系统评价和Meta分析计算机检索中国知网、维普数据库、万方数据知识服务平台、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase、The Cochrane Library 7个数据库,搜集有关补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的随机对照试验。应用Rev Man 5.3和Stata 14.0软件进行Meta分析、发表偏倚检测、敏感性分析、亚组分析,采用TSA 0.9软件对降压疗效进行试验序贯分析。2.横断面研究以绝经后高血压患者作为研究对象,采用横断面研究方法分析一般资料、中医证型分布、昼夜节律分布特点;进一步将纳入患者分为绝经<10年组和绝经≥10年组,分析两组患者动态血压参数是否存在差异;分析年龄与动态血压参数的相关性;血压变异性（blood pressure variability,BPV）用标准差（standard deviation,SD）和变异系数（coefficient of variation,CV）表示,采用多元线性回归方法分析各变量与BPV的关系。3.动物实验9周龄雌性去势SHR48只,随机分为6组,模型组（SHR组）、雌二醇组（SHR+E2组）、ICA低剂量组（SHR+LI组）、ICA中剂量组（SHR+MI组）、ICA高剂量组（SHR+HI组）、ICA中剂量+雌激素受体拮抗剂ICI182780组（SHR+MI+ICI组）。9周龄雌性去势WKY8只作为正常对照组（WKY组）。SHR+E2组给予戊酸雌二醇（0.1 mg/kg/day）灌胃,ICA低、中、高剂量组分别给予ICA 10 mg/kg/day、20 mg/kg/day、40 mg/kg/day灌胃,SHR+MI+ICI组给予ICA 20 mg/kg/day灌胃,并予氟维斯群注射液52 mg/kg/month皮下注射。监测各组大鼠体重、血压及心率;对心脏、脾脏及肾脏进行称重并计算脏器系数;采用ELISA法检测各组大鼠血清AngⅡ、Ang（1-7）、E2水平;采用Western-blot法检测各组大鼠心肌组织 AGT1R、MAS1、ACE1、ACE2、GPR30、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。结果:1.补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的系统评价和Meta分析（1）Meta分析结果显示:最终纳入14篇文献,共1139例患者。补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的降压疗效、更年期症状疗效优于西药组;SBP水平、DBP水平、kupperman评分、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）水平低于西药组;雌二醇（estradiol,E2）水平高于西药组。（2）不良反应发生率:补肾法联合降压药组低于西药组。（3）发表偏倚:对降压疗效绘制漏斗图并进行Egger’s法检验,提示纳入文献存在发表偏倚。（4）降压疗效的试验序贯分析:结果提示Meta分析可能过早出现阳性结果,可能存在假阳性结果。2.绝经后高血压患者中医证型分布及动态血压特点研究（1）本次研究共纳入214例患者,阴阳两虚型患者所占比例最高。（2）所有纳入患者中,非勺型昼夜节律患者所占比例最高。（3）绝经≥10 年组的 24hSBP、nSBP、收缩压极差（maximum-minimum difference between systolic blood pressure,MMD）、24hSBPSD、dSBPSD、24hSBPCV、dSBPCV、dDBPCV、nDBPCV 高于绝经<10 年组（P<0.05 或P<0.01）。（4）24hSBP、dSBP、nSBP、MMD、24hSBPSD、dSBPSD、nSBPSD、dSBPCV、dDBPCV 与年龄呈正相关（P<0.05 或P<0.01）;24hDBP、SBP-BPF、dDBP、nDBP、Hr与年龄呈负相关（P<0.05或P<0.01）。（5）24hSBPSD的相关因素有:MMD、MAP、日间血压负荷;24hDBPSD的相关因素有:24hDBP、DBP-BPF、MMD、高血压3级、BUN;24hSBPCV的相关因素有:24hSBP、24hDBP、MMD、日间血压负荷;24hDBPCV的相关因素有:MMD、MAP、SBP-BPF、DBP-BPF、BUN。3.淫羊藿苷通过调节RAS对雌性去势SHR发挥血压保护作用（1）平均动脉压（MAP）:与WKY组比较,SHR组MAP升高（P<0.05）;与SHR 组比较,SHR+E2 组、SHR+LI 组、SHR+MI 组、SHR+HI 组 MAP 降低（P<0.05）;与 SHR+MI 组比较,SHR+MI+ICI 组 MAP 升高（P<0.05）。（2）心率:与SHR组比较,SHR+LI组、SHR+MI组、SHR+HI组心率降低（P<0.05 或P<0.01）。（3）脏器系数:①心脏系数:与WKY组比较,6组SHR的心脏系数均升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI组心脏系数升高（P<0.05）。②左肾系数:与WKY组比较,SHR组左肾系数升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2组左肾系数降低（P<0.05）。③右肾系数:与WKY组比较,SHR组右肾系数升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2 组、SHR+LI 组、SHR+MI 组、SHR+HI 组左肾系数降低（P<0.05 或 P<0.01）。④脾脏系数:与WKY组比较,SHR组脾脏系数升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI组脾脏系数升高（P<0.05）。（4）ACE1-AngⅡ-AT1R轴:①ACE1蛋白:与WKY组比较,SHR组ACE1蛋白表达水平升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+MI组、SHR+HI组ACE1蛋白表达水平降低（P<0.05）。②AngⅡ含量:与WKY组比较,SHR组AngⅡ含量升高（P<0.01）;与SHR组比较,SHR+E2组、SHR+MI 组、SHR+HI 组 AngⅡ含量降低（P<0.05 或P<0.01）。③AGT1R蛋白:与SHR组比较,SHR+MI组AGT1R蛋白表达水平升高（P<0.05）。（5）ACE2-Ang（1-7）-MasR轴:①ACE2蛋白:与WKY组比较,SHR组ACE2蛋白表达水平升高（P<0.05）。②Ang（1-7）含量:与WKY组比较,SHR组Ang（1-7）含量升高（P<0.01）;与SHR+E2组比较,SHR+LI组Ang（1-7）含量升高（P<0.01）;与SHR+MI组比较,SHR+MI+ICI 组 Ang（1-7）水平降低（P<0.01）。③MAS1蛋白:与WKY组比较,SHR组MAS1蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。（6）E2及其受体GPR30:①E2含量:与SHR组比较,SHR+E2组、SHR+LI组、SHR+MI组、SHR+HI组的E2含量有升高趋势（P>0.05）。②GPR30蛋白:与WKY组比较,SHR组GPR30蛋白表达水平有升高趋势（P>0.05）。（7）ERK1/2 通路:①p-ERK1/2蛋白:与WKY组比较,SHR组p-ERK1/2蛋白表达水平有升高趋势（P>0.05）;与SHR组比较,SHR+HI组p-ERK1/2蛋白表达水平降低（P<0.05）。②p-ERK1/2/ERK1/2:与 WKY 组比较,SHR 组 p-ERK1/2/ERK1/2 有升高趋势（P>0.05）;与 SHR 组比较,SHR+E2 组、SHR+HI 组 p-ERK1/2/ERK1/2 有降低趋势（P>0.05）;与 SHR+MI 组比较,SHR+MI+ICI 组 p-ERK1/2/ERK1/2 升高（P<0.01）。结论:1.针对女性绝经后及围绝经期高血压患者,补肾法联合降压药能够降低患者的收缩压和舒张压水平、改善更年期症状、改善性激素水平,疗效优于西药组。2.阴阳两虚证是绝经后高血压患者最常见的中医证型,且绝经年限较长的高血压患者的BPV高于绝经年限较短者。3.ICA能够降低雌性去势SHR的血压和心率,上述作用与调节循环和心肌组织RAS 有关。ICA 可以抑制 ACE1-AngⅡ-AT1R 轴,对 ACE2-Ang（1-7）-MasR 轴具有升高的趋势,同时该作用的发挥与抑制ERK1/2通路有关。
黄宇[2]（2021）在《基于体内体外模型探讨冠心宁片抗心肌肥大的药效及其作用机制》文中提出心肌肥大是在各种生理和病理刺激因素下维持心输出量的代偿性反应。然而,长期的心肌肥大常常导致心脏失代偿,导致心力衰竭和猝死,也是全世界心脏发病率和死亡率的重要原因。目前,治疗心肌肥大的主流药物均为西药,主要为β受体阻断药和肾素-血管紧张素-醛固酮系统抑制剂等。传统西药治疗存在副反应多,最佳剂量不宜控制,疗效个体差异性大等诸多问题和缺陷。中药是我国传统医学的瑰宝,其具有作用组分多样,疗效温和,副作用小,标本兼治等特点,可从多维度多层次对机体进行调节和治疗。冠心宁片（GXN）是由其注射液经改进工艺并更改剂型而成的口服片剂。研究表明,其具有扩张血管和抗血栓等药理作用,临床应用于冠心病等的治疗,而针对GXN的抗心肌肥大作用,国内外尚未见相关文献报道。目前,抗心肌肥大中药的研发基本都处于实验研究阶段,而GXN是已经获得临床应用的中药制剂。因此,本文旨在通过研究GXN的抗心肌肥大药效及其作用机制,使GXN有望扩展临床应用于心肌肥大的治疗,由此可以有效缩短研发时间和节约研发成本,对比其他研发阶段的中药具有极大的优势,对促进中药的现代化研究也具有重要的意义。本文运用自发性高血压大鼠作为模型,评价GXN的体内抗心肌肥大作用。1.心动超声检测结果表明,SHR大鼠从15周龄时即已表现出明显的心肌肥大病理特征,而GXN给药组SHR大鼠心室壁厚度相关指标（IVSd、IVSs、LVPWs、LVPWd）均较模型对照组显着降低（P<0.05,P<0.01）,且GXN高剂量组效果优于阳性药氨氯地平组。2.GXN可有效降低SHR大鼠心脏重量和系数结果,其中高剂量组心脏系数结果有显着性下降趋势（P<0.05）,也优于阳性药氨氯地平组。3.通过麦胚凝集素（WGA）染色后对心肌细胞面积进行半定量分析,GXN给药之后,SHR大鼠心肌细胞横截面积和模型组相比明显下降（P<0.01）;心肌组织Masson染色结果可见与模型对照组比较,给予不同浓度GXN和阳性药氨氯地平之后,心肌细胞间质增生和纤维沉积情况好转,纤维化分值降低,GXN与氨氯地平药效相当。4.运用RT-PCR技术对SHR大鼠心肌肥大相关基因ANP、BNP和RCAN1 mRNA表达进行检测,结果表明与模型对照组相比,GXN给药组这3个与心肌肥大相关基因的mRNA表达均显着下降（P<0.05,P<0.01）,结果接近甚至好于阳性药组。通过分离大鼠乳鼠原代心肌细胞,并经异丙肾上腺素（Iso）诱导建立心肌细胞肥大模型用于评价GXN的体外抗心肌肥大作用。1.MTT法检测GXN对一般状态下的心肌细胞以及10 μg/mL Iso刺激后心肌细胞增殖活力的影响,结果显示,GXN在50μg/mL～1200μg/mL浓度区间内,对正常培养的心肌细胞和经Iso诱导的心肌细胞的增殖均未有明显影响（P>0.05）,表明GXN对心肌细胞具有较高的安全性。2.将细胞接种于12孔板,分为空白对照组,模型对照组（异丙肾上腺素Iso,10μmol/L）,GXN低剂量组（GXN 200 μg/mL）和GXN高剂量组（GXN 400 μg/mL）,GXN干预后12h加入Iso,培养48h后鬼笔环肽染色置于共聚焦显微镜下观察并拍照,图像分析系统测量单个细胞面积。结果显示,与模型对照组比较,GXN高剂量组心肌细胞的横截面积大小显着降低（P<0.01）。3.流式细胞术检测结果表明,GXN能在一定程度上抑制心肌细胞凋亡。4.RT-PCR法检测Bcl2和Bax基因mRNA的表达,结果显示,给予400 μg/mL GXN预保护后,Bcl2基因mRNA表达显着上升（P<0.01）,Bax基因mRNA表达显着下降（P<0.01）。5.Western-blot法检测MEK与ERK1/2蛋白表达及其磷酸化水平,以及Bcl2和Bax蛋白的表达水平。结果表明,模型对照组心肌细胞MEK和ERK1/2的磷酸化表达均显着上升（P<0.01）,GXN预保护后这2个蛋白的磷酸化表达均显着下降（P<0.05）。与RT-PCR结果一致,GXN预保护后,Bc12蛋白表达显着上升（P<0.05）,Bax蛋白表达显着下降（P<0.05）。本文确认了 SHR大鼠作为心肌肥大动物模型的适用性,并和Iso诱导的大鼠原代心肌细胞分别作为体内和体外模型,首次研究报道了 GXN的抗心肌肥大药效作用,为GXN作为抗心肌肥大药物的临床应用提供了理论依据。初步分析阐述了 GXN抗心肌肥大的作用机制与抑制ERK信号通路的异常激活进而抑制心肌细胞凋亡有关。
张雯雯[3]（2021）在《益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤大鼠内皮功能影响与机制的研究》文中研究表明目的:缺血再灌注损伤可见于心、脑、肺、肾等人体多个重要器官,探究其病理机制,最大程度降低损伤,提高临床疗效越来越成为医学界的研究热点。缺血心肌再灌注（MIRI）后无复流、慢复流致使心律失常甚至再梗死等并发症严重影响血运重建治疗的临床预后,其机制涉及冠脉微循环病变。西医治疗方案尚缺乏安全有效防治冠脉微循环障碍的药物,特别是血运重建后期治疗方面,中医药能够发挥未病先防、既病防变的特色优势,临床疗效明显,较西药治疗费用更低。目前国内关于中药单体及复方防治MIRI的研究虽有一定进展,但缺乏对多靶点作用机制的深入探究。宫丽鸿教授以“风扰心络为病”理论为基础,提出益气搜风、养血解痉、通络止痛之治法,总结自身多年临床经验结合前人古方,形成益气搜风中药组方黄芪复方,寓意补养心络亏虚之气血、搜剔内扰之毒风,以助心脉气血调和、脉道息风通络,改善心肌细胞因缺血缺氧形成的组织结构与功能损伤。此法以补为通,寓通于补,通补兼施,相辅相成,补气而不留邪,剔邪而不伤正,针对本虚标实的病理特点,可谓标本兼治。本研究通过冠脉结扎法复制建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型,以模型大鼠为研究对象,观察益气搜风中药黄芪复方对实验大鼠内皮功能影响与炎症反应、细胞凋亡相关因子蛋白与基因的表达,从对血管内皮功能的保护作用角度,探讨益气搜风中药对缺血再灌注损伤中微循环障碍的影响,并进一步揭示其产生作用可能相关的机制途径,丰富风扰心络为病之理论内涵,并为临床推广应用提供实验依据。材料与方法:1.心肌缺血再灌注损伤模型建立与益气搜风中药对模型大鼠内皮功能影响:将120只（240±20）g SD大鼠随机分为假手术组、模型组、培哚普利组、益气搜风中药黄芪复方低中高剂量组,共6组,每组20只。根据成人（按体重60kg计算）常用剂量与实验动物用药剂量换算公式,折算出大鼠剂量,每组给予不同预处理。假手术组、模型组大鼠均予生理盐水10 mL·kg-1灌胃;益气搜风中药低、中、高剂量组分别予含黄芪复方1.8g·kg-1、3.6 g·kg-1、7.2 g·kg-1药液灌胃;培哚普利组予以含有培哚普利浓度为0.4mg·kg-1溶液灌胃。上述操作各组日1次,持续7d。第7d灌胃完毕1h采用冠脉结扎法建立心肌缺血再灌注模型;其中假手术组术中不结扎冠脉,余操作同其它各组;分别记录结扎30 min时与再灌注120 min时大鼠ECG情况;选取Ⅱ导联为实验中主要观察目标,以ST段变化作为心肌缺血标志;以ST段显着抬高判定结扎成功,以抬高的ST段回落幅度达1/2判定再灌注造模成功。造模成功后进行取材,取材前夜（即第6d）大鼠禁食不禁水。取腹主动脉取血,静置后离心,上清液-20℃保存,用于后续实验;采血后即刻处死大鼠,无菌条件下取出心脏,经灭菌生理盐水清洗以10%甲醛固定,-20℃冻存用于后续实验。采用ELISA法检测各组血清中TXA2、PGI2、s TM、s EPCR的含量,比较各组TXA2/PGI2比值。2.益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮炎症因子的影响:取已采集的各组大鼠血清,采用ELISA法检测各组血清中IL-8、IL-6、TNF-α含量。3.益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮细胞凋亡的影响:取已采集的各组大鼠心脏组织,电子天平称取左心室心尖部位100mg,高通量组织研磨仪研磨组织,研磨好的心肌组织置于预先配制好的500ul裂解液,以12000 rpm速度离心10 min后取上清液,经处理后采用Western Blot法测定各组Akt、P-Akt、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,采用蛋白质定量（BCA）法测定蛋白浓度,采用ECL化学发光检测法检测,实验结果通过成像系统显示;采用RT-PCR法测定Aktm RNA、eNOS m RNA、Baxm RNA、Bcl-2 m RNA表达水平,采用引物设计软件Primer Premier 5.0设计引物,采用2-ΔΔct法对各样品中基因的表达差异进行相对定量分析。统计学处理均采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析,Graphpad Prism 9.0.0版统计软件绘制数据分析图,计量资料以（?）表示,组间比较采用单因素方差分析,两两比较方差齐采用LSD检验。P<0.05表示存在统计学差异,P<0.01表示差异显着,P>0.05为差异不具有统计学意义。结果:1.心肌缺血再灌注损伤模型建立与益气搜风中药对模型大鼠内皮功能影响:1.1复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型:模型建立过程中各组大鼠存活情况:麻醉操作后,死亡1只大鼠;气管插管与术中行结扎、再灌注等操作时,因呼吸停止、大出血和室颤共造成37只大鼠死亡,其中假手术组5只、其他造模组32只。各组存活大鼠数量满足后续实验需求。造模情况:经心电图监测观察结扎时与再灌注后大鼠Ⅱ导联心电变化,筛除未符合ST段改变标准大鼠8只,成功造模总数59只,各组造模成功大鼠数量满足指标检测需求。1.2各组大鼠血清TXA2、PGI2水平及TXA2/PGI2比值:相较假手术组,模型组TXA2水平显着升高,PGI2水平显着降低,TXA2/PGI2明显升高（P<0.01）;相较模型组,培哚普利组和益气搜风中药黄芪复方各剂量组TXA2含量均显着降低,PGI2含量显着升高,TXA2/PGI2显着下降（P<0.01）;相较于培哚普利组,益气搜风中药中剂量组TXA2、PGI2含量与TXA2/PGI2均无明显差异（P>0.05）。1.3各组大鼠血清s TM、s EPCR水平:相较于假手术组,模型组s TM、s EPCR含量显着升高（P<0.01）;相较于模型组,培哚普利组和益气搜风中药各剂量组s TM、s EPCR含量均显着降低（P<0.01）;相较于培哚普利组,中药各剂量组s TM、s EPCR含量升高（P<0.05）。2.益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮炎症因子的影响:2.1各组大鼠血清IL-6、IL-8水平:相较假手术组,模型组IL-6、IL-8含量显着升高（P<0.01）;相较模型组,培哚普利组和中药各剂量组IL-6、IL-8含量均显着降低（P<0.01）;相较于培哚普利组,中药中剂量组IL-6、IL-8含量无明显差异（P>0.05）。2.2各组大鼠血清TNF-a水平:相较假手术组,模型组TNF-a含量显着升高（P<0.01）;相较于模型组,培哚普利组和中药各剂量组TNF-a含量均显着降低（P<0.01）;相较于培哚普利组,中剂量组TNF-a含量无明显差异（P>0.05）。3.益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮细胞凋亡的影响:3.1各组大鼠Akt、eNOS m RNA的表达:相较假手术组,模型组Akt m RNA、eNOS m RNA表达显着降低（P<0.01）;相较模型组,培哚普利组与益气搜风中药各剂量组Akt mRNA、eNOS m RNA表达均增加（P<0.05）;相较于培哚普利组,益气搜风中药中剂量组Akt mRNA、eNOS mRNA表达无明显差异（P>0.05）。3.2各组大鼠Akt、P-Akt蛋白表达与P-Akt/Akt 比值:相较假手术组,模型组Akt、P-Akt蛋白表达显着降低（P<0.01）;相较模型组,培哚普利组、益气搜风中药各剂量组Akt、P-Akt蛋白表达显着增加（P<0.01）;相较于培哚普利组,益气搜风中药中剂量组Akt蛋白表达、P-Akt/Akt 比值无明显差异（P>0.05）,高剂量组P-Akt蛋白表达无明显差异（P>0.05）。3.3各组大鼠Bcl-2、Bax mRNA的表达:相较假手术组,模型组Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达均升高（P<0.05）;相较模型组,培哚普利组与益气搜风中药各组Bcl-2mRNA表达均升高,Bax mRNA表达降低（P<0.05）;与培哚普利组相比,益气搜风中药中剂量组Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达无明显差异（P>0.05）。3.4各组大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达与Bcl-2/Bax比值:相较假手术组,模型组Bcl-2、Bax蛋白表达均显着升高,Bcl-2/Bax比值显着降低（P<0.01）;相较模型组,培哚普利组、益气搜风中药中剂量组Bcl-2蛋白表达与Bcl-2/Bax比值均显着升高,Bax蛋白表达显着降低（P<0.01）;相较于培哚普利组,益气搜风中药中剂量组Bcl-2蛋白表达无明显差异（P>0.05）。结论:1.益气搜风中药黄芪复方能够调控血管内皮功能损伤因子的表达,提示益气搜风中药复方对MIRI大鼠血管内皮功能可能具有保护作用。2.益气搜风中药复方能够下调大鼠IL-8、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达,提示益气搜风中药复方对MIRI大鼠心肌的保护作用可能与抑制炎性反应有关。3.益气搜风中药复方能够上调PI3K/Akt信号通路中关键靶蛋白Akt及其下游eNOS mRNA表达水平;干预Akt及P-Akt蛋白表达水平,调控P-Akt/Akt平衡;同时调控凋亡因子Bcl-2、Bax基因与蛋白的表达。提示益气搜风中药复方改善MIRI血管内皮功能的机制可能与激活PI3K/Akt信号通路活性从而调控细胞凋亡有关。
朱国双[4]（2020）在《基于FGF23/CaMKⅡ信号通路探讨肾元颗粒对糖尿病肾病小鼠心肌损伤的干预作用及其机制》文中研究表明目的:本次实验以自发型糖尿病db/db小鼠作为研究模型,并通过观察FGF23/CaMKⅡ信号通路介导的内质网应激,探讨db/db小鼠心肌损伤的可能机制及肾元颗粒的干预作用。方法:将45只db/db雄性小鼠随机分为3组,模型组（Modle Group,MD）、厄贝沙坦组（Ibesartan Group,IBT）、肾元颗粒组（Shen Yuan Ke Li Group,SYKL）,每组15只;15只同窝野生型小鼠则自动成为正常对照组（Normal control Group,NC）。NC组小鼠给予正常小鼠饲料喂养,MD组、SYKL组和IBT组给予高磷饲料（磷1.2%,钙1.6%）。小鼠适应性喂养1周后,对各组小鼠进行12周药物干预。NC组和MD组给予双蒸水灌胃,IBT组予以厄贝沙坦混悬液灌胃(30mg·kg-1),SYKL组予以肾元颗粒混悬液灌胃(6.0g·kg-1),各组小鼠给药体积相同(20mL·kg-1·d-1)。在此期间,监测各组小鼠精神、饮食、饮水、体重以及尿量等一般状况,检测各组小鼠尿微量白蛋白的含量及血糖水平。12周后,处死小鼠,收集各组小鼠血液和心肾组织。取一部分肾脏和心脏组织采用多聚甲醛固定,余置于-80℃冰箱中冻存。采用全自动生化仪检测各组小鼠血清中钙磷含量、血肌酐、尿素氮;HE染色和Masson染色观察小鼠心脏和肾脏的病理形态情况改变;Tunel染色检测心肌细胞凋亡情况;免疫荧光双标检测各组小鼠肾脏Klotho和FGFR1相互作用的情况;免疫荧光检测各组小鼠心脏FGFR4和PLCγ1蛋白表达情况;免疫组化检测各组小鼠心脏p-CaMKⅡ以及内质网应激标志蛋白GRP78和CHOP表达情况;ELISA检测血清中FGF23含量以及尿液中尿微量白蛋白含量;Real-time PCR检测各组小鼠肾脏中Klotho和心脏中ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、Bcl-2、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1的mRNA表达情况;Western Blot检测各组小鼠肾脏中Klotho和心脏中Bax、Bcl-2、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达情况。结果:1.各组小鼠一般状况:NC组小鼠皮毛光亮致密有泽,饮水、进食均正常,体重增加较为平稳,小鼠活跃,精神状态良好。与NC组小鼠比,MD组小鼠随着时间的推移皮毛暗淡无泽,伴有体重增加（P<0.01）、多饮、多食、小便量多,小鼠垫料反复湿透,精神不振,动作迟缓,反应迟钝。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠皮毛稍有光泽,伴有体重增加（P>0.05）、多饮、多食、小便量多,小鼠垫料反复湿透,但精神较MD组小鼠为佳,运动稍迟缓,反应欠灵敏。2.各组小鼠生化指标结果:NC组小鼠生化指标正常,血磷、血钙、Scr、BUN和mALB未见异常波动。与NC组小鼠比,MD组小鼠mALB、血磷和肾功能指标Scr、BUN均出现不同水平的上调（P<0.01）,而小鼠血钙含量具有不同水平的下调（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠mALB、血磷和肾功能指标Scr、BUN具有不同水平的下调（P<0.05）,而小鼠血钙含量具有不同水平的上调（P<0.05）。3.各组小鼠血糖结果:NC组小鼠血糖正常,随着时间的推移并未见血糖异常波动。与NC组小鼠比较,MD组小鼠血糖随着时间的推移而逐渐升高（>16.7mmol/L）,且两组之间的差异具有显着意义（P<0.01）;予以肾元颗粒和厄贝沙坦干预12周后,SYKL组和IBT组小鼠血糖未见下降,且与MD组小鼠差异无统计学意义（P>0.05）。4.各组小鼠肾脏病理染色结果:NC组小鼠肾脏表面光滑,未见隆起和破损,大小正常;HE染色可见NC组小鼠肾单位结构清晰完整,小球系膜细胞及基质未见增生,基底膜无增厚,未见纤维组织增生,未见肾小管水肿;Masson染色提示NC小鼠肾脏未见蓝色胶原纤维沉积。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏体积出现显着增大,颜色质地偏暗,表面点状隆起,可见少许脓点;HE染色提示MD组小鼠肾小球体积增大,囊腔变窄,系膜细胞增生,基底膜和系膜增厚;Masson染色提示MD组小鼠肾脏可见显着的蓝色胶原纤维沉积（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏表面较为光滑,未见隆起和破损,肾脏体积稍增大;HE染色SYKL组和IBT组小鼠可见较为清晰的肾单位,小球系膜细胞及基质增生减轻,基底膜稍增厚;Masson染色提示SYKL组和IBT组小鼠肾脏蓝色胶原纤维沉积较轻,胶原沉积百分比低于MD组小鼠（P<0.01）。5.各组小鼠HW/BW指数结果:NC组小鼠HW/BW指数正常,未见显着升高。与NC组小鼠比,MD组小鼠HW/BW指数显着上调（P<0.01）;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠HW/BW指数显着的下调（P<0.01）。6.各组小鼠心脏病理染色结果:NC组小鼠心脏大小正常,色泽红润,组织表面未见脂肪组织附着;HE染色显示NC组小鼠心肌无肥大表现,心肌细胞及心肌纤维排列整齐,未出现心肌纤维的断裂,无心肌间质成纤维细胞浸润及增殖增加;Masson染色提示NC组小鼠心脏未见蓝色胶原纤维沉积。与NC组小鼠比,MD组小鼠心脏体积肥大,色泽为暗褐色,表面可见脂肪组织附着;HE染色显示MD组小鼠心肌细胞肥大,心肌细胞和肌纤维排列紊乱,以及心肌纤维断裂;Masson染色提示MD组小鼠心肌胶原沉积明显增加（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心脏体积稍变小,心脏表面附着脂肪组织;HE染色显示SYKL组和IBT组小鼠心肌细胞肥大减轻,心肌细胞和心肌纤维排列稍紊乱,出现少部分的心肌纤维的断裂;Masson染色提示SYKL组和IBT组小鼠心胶原沉积明显减少（P<0.01）。7.各组小鼠血清ELISA检测结果:NC组小鼠血清FGF23含量水平正常,未见异常波动。与NC组小鼠比,MD组小鼠血清FGF23含量显着上调（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠血清FGF23含量出现不同水平的下调（P<0.05,P<0.01）。8.各组小鼠心脏和肾脏Real-time PCR检测结果:NC组小鼠肾脏Klotho mRNA表达正常,未见降低,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1 mRNA表达相对较低,心脏Bcl-2 mRNA表达维持在较高水平。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏Klotho mRNA表达显着降低（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1 mRNA表达出现升高（P<0.05,P<0.01）,心脏Bcl-2 mRNA表达出现显着降低（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏Klotho mRNA表达显着升高（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1 mRNA表达出现降低（P<0.05,P<0.01）,心脏Bcl-2 mRNA表达出现显着升高（P<0.01）。9.各组小鼠心脏和肾脏Western Blot检测结果:NC组小鼠肾脏Klotho蛋白表达正常,未见降低,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达相对较低,心脏Bcl-2蛋白表达维持在较高水平。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏Klotho蛋白表达显着降低（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达显着升高（P<0.01）,心脏Bcl-2蛋白表达出现显着降低（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏Klotho蛋白表达显着升高（P<0.01）,心脏ANP、BNP、CollagenⅠ、Bax、GRP78、CHOP、FGFR4、PLCγ1、p-CaMKⅡ蛋白表达出现降低（P<0.01）,心脏Bcl-2蛋白表达出现显着升高（P<0.01）。10.各组小鼠心脏IHC检测结果:NC组小鼠心肌细胞中GRP78、CHOP和p-CaMKⅡ蛋白表达较其他三组低;与NC组小鼠比,MD组小鼠心脏GRP78、CHOP和p-CaMKⅡ蛋白阳性表达结果占比显着增加（P<0.01）;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心脏GRP78、CHOP和p-CaMKⅡ蛋白阳性表达结果占比显着增加（P<0.01）。11.各组小鼠心脏Tunel染色结果:NC组小鼠心肌细胞核未见明显着色。与NC组小鼠比,MD组小鼠心肌细胞核着色增加,提示心肌细胞凋亡显着增加（P<0.01）;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心肌细胞凋亡数量明显减少（P<0.01）。12.各组小鼠心脏免疫荧光染色结果:NC组小鼠比,MD组小鼠心脏FGFR4、PLCγ1蛋白荧光强度显着增加（P<0.01）。与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠心脏FGFR4、PLCγ1蛋白荧光强度明显减少（P<0.01）。13.各组小鼠肾脏免疫荧光双标染色结果:NC组小鼠肾脏Klotho和FGFR1蛋白的表达量及共定位蛋白量多。与NC组小鼠比,MD组小鼠肾脏Klotho和FGFR1共定位蛋白显着减少;与MD组小鼠比,SYKL组和IBT组小鼠肾脏Klotho和FGFR1共定位蛋白显着增加。结论:1.肾元颗粒可改善db/db小鼠钙磷代谢和肾功能,减轻小鼠肾脏病理损伤;2.肾元颗粒可通过抑制内质网应激改善db/db小鼠心肌损伤的发生;3.肾元颗粒可通过上调Klotho蛋白的表达,使得FGF23/CaMKⅡ信号通路得到抑制,减少CaMKⅡ磷酸化,使得其介导的内质网应激信号通路减弱。
侯智敏[5]（2020）在《厄贝沙坦对2型糖尿病肾病大鼠肾脏miR-93及其调控蛋白表达的影响》文中认为目的通过观察厄贝沙坦对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的2型糖尿病肾病（type 2 diabetic nephropathy,T2DN）大鼠肾脏mi R-93及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）、IV型胶原蛋白（Collagen IV,Col-IV）蛋白表达的影响,以探讨ARB类药物保护肾脏的可能机制。方法将雄性10周龄的Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组（NC组）、糖尿病肾病模型组（DN组）、厄贝沙坦治疗组（DN+I组）,每组各10只。通过高脂饲料喂养结合腹腔注射小剂量的STZ（28 mg/kg）制备DN大鼠模型,建模成功后DN+I组给予厄贝沙坦（50mg/kg/d）灌胃处理,NC组和DN组用等量的生理盐水灌胃。定期测定大鼠体质量、血糖、24h尿蛋白;处死大鼠前一天通过眼眶取血,测定血肌酐、尿素氮等生化指标;于22周末处死大鼠留取肾脏,肾组织行HE、Masson染色,在光镜下观察肾组织形态学改变。采用q RT-PCR法检测肾组织mi R-93的表达水平,采用Western blot和免疫组化法检测肾组织VEGF、FN、Col-IV的表达情况。结果1.各组大鼠常规指标和尿蛋白的比较:与NC组比较,DN组大鼠的FBG、BUN、SUA、24h UA1b水平升高（P<0.05）;与DN组比较,DN+I组大鼠的SUA、24h UA1b水平下降（P<0.05）,但FBG、BUN水平无明显变化（P>0.05）;Scr水平在三组间无明显差异（P>0.05）。2.各组大鼠肾脏病理改变HE染色结果显示NC组的肾小球、肾小管及肾间质的结构清楚,无明显的病理改变。DN组可见肾小球毛细血管袢呈分叶状,肾小囊腔变窄,系膜细胞增生,系膜基质增加,系膜区增宽,肾小管上皮细胞可见空泡样变性,肾间质有炎性细胞浸润。DN+I组上述病理改变较DN组轻。Masson染色结果显示NC组肾小球系膜区和肾间质可见少量的胶原纤维,DN组肾小球系膜区和间质可见明显的胶原纤维堆积,DN+I组胶原纤维沉积较DN组减轻。3.q RT-PCR结果显示,与NC组比较,DN组大鼠肾脏mi R-93表达降低（P<0.05）;与DN组比较,DN+I组大鼠肾脏mi R-93的表达上调（P<0.05）。4.Western blot结果:与NC组比较,DN组大鼠肾组织VEGF蛋白表达增多（P<0.05）;与DN组比较,DN+I组大鼠肾脏VEGF蛋白的表达减少（P<0.05）。5.免疫组化结果显示VEGF、FN、Col-IV均主要表达于胞浆;VEGF主要表达于肾小球系膜区、肾小管上皮细胞和肾间质,FN主要表达于肾小管上皮细胞和肾间质,Col-IV主要表达于肾小球系膜区和肾间质;与NC组比较,DN组的阳性着色颗粒明显增多,着色面积增大,DN+I组的阳性着色颗粒和着色面积较DN组减少。结论本实验通过对DN大鼠模型研究发现,厄贝沙坦治疗后DN大鼠24h UA1b及肾脏病理改变明显减轻,进一步证实了厄贝沙坦对DN肾脏的保护和治疗作用。DN大鼠肾脏mi R-93表达较正常大鼠降低,提示mi R-93的表达紊乱可能参与了DN的发生和发展;厄贝沙坦治疗后mi R-93表达显着上调,而VEGF以及FN、Col-IV蛋白表达显着下降,提示厄贝沙坦可能通过影响mi R-93的表达,进一步抑制其靶蛋白VEGF及其下游效应分子的表达而发挥肾脏保护作用。本实验可为ARB类药物治疗DN提供新的理论依据和治疗靶点。
赵强[6]（2019）在《ERK1/2信号通路对衰老心肌缺血损伤的影响和调控机制研究》文中认为目的细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2）信号通路是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路的重要组成部分,在细胞生存、凋亡、炎症反应以及应激损伤等多种生物学过程中扮演着重要的调控角色。然而,ERK1/2信号通路在衰老心肌缺血损伤中的变化及其调节作用还不清楚。因此,本研究首先观察老龄小鼠心肌和衰老心肌细胞缺血/缺氧损伤后ERK1/2信号通路的变化,探讨ERK1/2信号通路变化与心肌损伤的关联性;其次,利用组成性激活MEK1突变基因（constitutively active MEK1,CaMEK）转导干预ERK1/2信号通路后研究该信号通路对老龄小鼠心肌缺血损伤和衰老心肌细胞缺氧损伤的调控作用;最后,从线粒体融合与分裂角度探讨ERK1/2信号通路参与衰老心肌缺血/缺氧损伤调控过程的分子机制。方法本研究在动物和细胞水平开展实验,分为三个部分:（1）第一部分:将年轻（12周-16周龄）和老龄（16月龄）雄性C57BL/6J小鼠分为年轻假手术组、年轻心肌梗死（myocardial infarction,MI）组、老龄假手术组和老龄MI组。MI组小鼠进行结扎左冠状动脉前降支血管处理,而假手术组小鼠不结扎冠状动脉。在小鼠MI后3天或28天检测小鼠心功能、心肌梗死面积、心肌损伤标志物乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和肌酸激酶（creatine kinase,CK）水平,并通过Western blot实验检测心肌组织ERK1/2信号通路关键蛋白表达水平。同时,提取培养新生Sprague-Dawley大鼠原代心肌细胞,分为非衰老对照组、非衰老缺氧组、衰老对照组和衰老缺氧组。衰老心肌细胞模型由20g/L D-半乳糖诱导建立,并通过衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-Gal）染色和衰老标志物检测进行鉴定。细胞缺氧处理由缺氧小室诱导完成。在心肌细胞缺氧24小时后检测细胞活力、LDH水平和ERK1/2信号通路关键蛋白表达。（2）第二部分:将老龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、MI空白对照组、MI+GFP基因转导（MI+GFP）组和MI+CaMEK基因转导（MI+CaMEK）组,MI建模同第一部分,MI+GFP组和MI+CaMEK组小鼠分别在MI建模前5周经尾静脉注射AAV9-CMV-GFP和AAV9-CMV-CaMEK(MOI=1×1011vg/小鼠)进行病毒感染。在小鼠MI后3天或28天,采用超声分析系统评估小鼠心功能,应用相应试剂盒检测血清LDH、CK水平和心肌ATP含量,DHE染色检测心肌组织活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡指数,并通过Western blot实验检测心肌组织ERK1/2信号通路关键分子、线粒体融合与分裂调控蛋白以及凋亡相关蛋白的表达。（3）第三部分:将新生Sprague-Dawley大鼠原代心肌细胞经D-半乳糖诱导为衰老心肌细胞,分为对照组、缺氧组、缺氧+GFP组、缺氧+CaMEK组、缺氧+DMSO组和缺氧+PD98059组。细胞缺氧处理同第一部分。缺氧+GFP组和缺氧+CaMEK组心肌细胞分别予以AAV9-CMV-GFP或AAV9-CMV-CaMEK（MOI=1×107vg/cell）感染5天,再进行缺氧处理。缺氧+PD98059组心肌细胞给予ERK1/2信号通路特异性抑制剂PD98059（浓度50μmol/L）处理,直至缺氧处理结束。细胞处理完毕后,采用CCK-8试剂盒、LDH试剂盒和流式细胞术分别检测细胞活力、毒性和凋亡,应用Mito SOX、Mito Tracker和JC-1荧光探针分别检测心肌细胞线粒体ROS水平、形态和膜电位水平,通过Western blot实验检测细胞ERK1/2信号通路、线粒体融合与分裂调控蛋白以及凋亡相关蛋白的表达变化。结果（1）第一部分:（1）小鼠心功能:与同龄假手术组小鼠相比,MI组小鼠在MI建模后3天和28天的左心室短轴缩短率（fractional shortening,FS）和左心室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）显着降低,差异有统计学意义（P均<0.05）;与年轻MI组小鼠相比,老龄MI组小鼠在MI建模后3天的FS降低,而在MI建模后28天的FS和LVEF均降低,差异有统计学意义（P均<0.05）。（2）小鼠心肌梗死面积:与年轻MI组小鼠相比,老龄MI组小鼠MI建模后28天的心肌梗死面积明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）小鼠血清LDH和CK水平检测:与同龄假手术组小鼠相比,MI组小鼠血清LDH和CK水平升高,差异有统计学意义（P均<0.05）。与年轻MI组小鼠相比,老龄MI组小鼠血清LDH和CK水平升高,差异有统计学意义（P均<0.05）。（4）心肌细胞衰老鉴定:与非衰老心肌细胞相比,20g/L D-半乳糖诱导48小时使得心机细胞SA-β-Gal染色阳性比例以及p16、p21蛋白表达水平显着增加,差异有统计学意义（P均<0.05）。（5）细胞活力和LDH水平检测:与相应对照组相比,缺氧处理使衰老和非衰老心肌细胞活力降低、LDH水平升高,差异有统计学意义（P均<0.05）;与非衰老缺氧组相比,衰老缺氧组心肌细胞活性降低而LDH水平增高,差异有统计学意义（P均<0.05）。（6）ERK1/2信号通路关键蛋白表达:与相应对照组相比,年轻小鼠心肌组织和非衰老心肌细胞缺血/缺氧处理后p-ERK/t-ERK比值显着升高,差异有统计学意义（P均<0.05）;而老龄小鼠心肌组织和衰老心肌细胞缺血/缺氧处理后ERK1/2信号通路变化差异无统计学意义。（2）第二部分:（1）老龄小鼠心肌ERK1/2信号通路关键蛋白表达:MI+CaMEK组小鼠心肌组织MEK表达水平和p-ERK/t-ERK比值较其他组均升高,差异有统计学意义（P均<0.05）。（2）老龄小鼠心功能、心肌损伤标志物和心肌梗死面积测定:与MI+GFP组小鼠相比,MI+CaMEK组小鼠MI后3天的LVEF升高而血清LDH和CK水平下降,MI后28天的心肌梗死面积缩小,差异有统计学意义（P均<0.05）。（3）心肌组织ROS水平:与假手术组小鼠相比,MI+GFP组小鼠心肌组织ROS水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与MI+GFP组小鼠相比,MI+CaMEK组小鼠心肌组织ROS水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）。（4）心肌组织线粒体融合与分裂调控蛋白表达和ATP水平检测:与假手术组小鼠相比,MI+GFP组小鼠心肌组织Mfn1表达降低、Drp1表达及其Ser616位点磷酸化水平升高,而ATP水平降低,差异有统计学意义（P均<0.05）;与MI+GFP组小鼠相比,MI+CaMEK组小鼠心肌组织Mfn1表达增加、Drp1表达及其Ser616位点磷酸化水平降低,而ATP水平增加,差异有统计学意义（P均<0.05）。（5）凋亡相关调控蛋白表达和细胞凋亡检测:与假手术组小鼠相比,MI+GFP组小鼠心肌组织Bcl-2/Bax比值降低而心肌细胞凋亡比例增加,差异有统计学意义（P均<0.05）;与MI+GFP组小鼠相比,MI+CaMEK组小鼠心肌组织Bcl-2/Bax比值升高而心肌细胞凋亡比例减少,差异有统计学意义（P均<0.05）。（3）第三部分:（1）衰老心肌细胞ERK1/2信号通路关键蛋白表达:缺氧+CaMEK组心肌细胞MEK表达和p-ERK/t-ERK比值较缺氧+GFP组心肌细胞升高,而缺氧+PD98059组心肌细胞p-ERK/t-ERK比值较缺氧+DMSO组心肌细胞降低,差异有统计学意义（P均<0.05）。（2）衰老心肌细胞活力和细胞毒性检测:与缺氧+GFP组心肌细胞相比,缺氧+CaMEK组心肌细胞活力增加而LDH水平降低,差异有统计学意义（P均<0.05）;与缺氧+DMSO组心肌细胞相比,缺氧+PD98059组心肌细胞活力降低而LDH水平升高,差异有统计学意义（P均<0.05）。（3）线粒体ROS水平:缺氧组心肌细胞线粒体ROS水平较对照组升高,缺氧+CaMEK组心肌细胞线粒体ROS水平较缺氧+GFP组心肌细胞降低,缺氧+PD98059组心肌细胞线粒体ROS水平较缺氧+DMSO组心肌细胞升高,差异有统计学意义（P均<0.05）。（4）线粒体融合与分裂调控蛋白、线粒体形态学和功能改变:与对照组心肌细胞相比,缺氧组心肌细胞Mfn1水平降低、Drp1表达及其Ser616位点磷酸化水平升高,线粒体平均长度和平均数量增加,线粒体膜电位和ATP水平降低,差异有统计学意义（P均<0.05）;与缺氧+GFP组心肌细胞相比,缺氧+CaMEK组心肌细胞Mfn1水平增加、Drp1表达及其Ser616位点磷酸化水平降低,线粒体平均长度和平均数量均减少,线粒体膜电位和ATP水平升高,差异有统计学意义（P均<0.05）;与缺氧+DMSO组心肌细胞相比,缺氧+PD98059组心肌细胞Mfn1水平降低、Drp1表达及其Ser616位点磷酸化水平升高,线粒体平均长度和平均数量均增加,线粒体膜电位和ATP水平降低,差异有统计学意义（P均<0.05）。（5）凋亡相关调控蛋白和细胞凋亡检测:与对照组相比,缺氧组心肌细胞Bcl-2/Bax比值降低而细胞凋亡比例增加,差异有统计学意义（P均<0.05）;与缺氧+GFP组心肌细胞相比,缺氧+CaMEK组心肌细胞Bcl-2/Bax比值升高而细胞凋亡比例降低,差异有统计学意义（P均<0.05）;与缺氧+DMSO组心肌细胞相比,缺氧+PD98059组心肌细胞Bcl-2/Bax比值降低而细胞凋亡比例增加,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论:（1）衰老心肌对缺血/缺氧损伤的耐受性明显降低,其ERK1/2信号通路活化明显受限,表明ERK1/2信号通路在衰老心肌损伤中发挥关键的调控作用。（2）本研究构建的AAV9-CMV-CaMEK能够在动物和细胞水平靶向激活心肌ERK1/2信号通路,是干预该信号通路有效的工具。（3）在老龄小鼠中,AAV9-CMV-CaMEK靶向激活心脏组织ERK1/2信号通路能够减轻缺血所致氧化应激损伤,调控心肌线粒体融合和分裂相关蛋白（Mfn1和Drp1）的表达,促进细胞能量供应,抑制细胞凋亡,减轻缺血后的心脏功能损害。（4）在衰老心肌细胞中,AAV9-CMV-CaMEK靶向激活ERK1/2信号通路能够抑制缺氧引起的线粒体ROS过度生成,通过调节线粒体融合和分裂相关蛋白Mfn1和Drp1的表达与活化,促进线粒体融合、抑制线粒体过度分裂,维持线粒体形态和功能稳定,发挥促进细胞生存和抑制细胞凋亡的保护作用。
贤明华[7]（2018）在《基于“中药-网络-效应”整合的益心舒胶囊作用解析及策略拓展应用》文中研究指明研究背景中药方剂是指在中医药理论指导下由不同中药配伍而成的方药。中药方剂由于其临床疗效好、毒副作用小等特点而被广泛应用,成为中医临床应用的主要的治疗形式和手段。但是由于中药方剂所含成分复杂,制约了对其作用机制的深入研究,影响了其在临床上的精准应用。针对中药方剂品种临床定位模糊和作用机制不清的问题,本课题通过对代表性中药方剂益心舒胶囊（YXS）的研究,提出了“中药-网络-效应”的整合模式,解析成分群与分子网络关联性,系统分析了YXS的作用机制及临床应用特点,并将这一模式拓展到中药方剂小儿扶脾颗粒（XEFP）研究。本课题以益心舒胶囊（YXS）为例,提出并验证“中药-网络-效应”的研究策略可行性。YXS是基于《内外伤辨惑论》名方“生脉散”研制开发的复方制剂,是中成药的代表药物之一。YXS主要由人参、麦冬、五味子、黄芪、丹参、川芎、山楂等七味中药材组成。YXS在临床上已有被应用于慢性心功能衰竭（heart failure,HF,心衰）、心脏神经官能症和冠心病心绞痛等心血管疾病。然而,大多研究多限于YXS治疗心衰等临床观察的研究,尚未对YXS干预心衰的分子作用机制开展研究。这制约了 YXS在临床上的定位和精准应用。因此,开展YXS干预心衰的作用解析研究具有必要性。另外,本课题将“中药-网络-效应”的研究模式拓展应用到小儿扶脾颗粒（XEFP）的研究。XEFP是基于《太平惠民合剂局方》名方“参苓白术散”裁减而研制的中药方剂品种,是中成药的代表药物之一。XEFP主要由白术、陈皮、党参、茯苓、莲子、山楂等六味药组成,具有健脾胃,助消化功效,临床常用于治疗小儿脾胃气虚,消化不良。然而,大多研究多限于XEFP干预小儿厌食症临床观察的研究,尚未对XEFP干预功能性消化不良的分子作用机制开展研究。因此,本课题将“中药-网络-效应”的研究模式拓展应用到XEFP作用解析研究具有必要性。因此,针对YXS和XEFP的临床定位模糊和作用机制不清的问题,本课题提出了“中药-网络-效应”整合策略,即通过中药方剂各化学成分的网络药理学分析,结合蛋白质组学等技术,构建中药与生物效应的网络联系,选择合适的药理模型,揭示中药成分与靶标之间的相互作用关系及各个节点的生物学意义,阐明其的复杂作用机制,期以指导临床定位。研究内容第一部分基于“中药-网络-效应”整合的益心舒胶囊干预心衰作用解析研究首先基于网络药理学策略,分析了 YXS的化学成分、分子靶标和疾病网络,并通过体内、体外心衰模型,考察了 YXS干预心衰的药理作用。在此基础上,通过对心衰大鼠海马组织的检测,考察了 YXS对心衰导致大脑海马组织功能异常的干预作用效果。1基于BATMAN-TCM数据库,提取了 YXS相关的334个化学成分与相应的1874个分子靶标。结合DAVID数据库和STRING数据库的分析,得到YXS化学成分、分子靶标和疾病的网络关系,富集结果发现YXS可能与动脉粥样硬化、心衰、抑郁症和焦虑症等疾病相关。通过中医理论、YXS临床经验和生物信息学分析三个维度,本课题重点考察YXS干预心衰疾病的药效及其作用机制。2通过冠状动脉左前降支结扎的方法建立大鼠心衰模型,检测超声心动图和生化指标,发现YXS连续干预6周后,能明显减少心衰大鼠心室腔增大,增加左心室射血分数,明显减少脑钠肽（BNP）和N-端脑钠肽前体（NT-proBNP）水平;并通过内皮素-1（endothelin-1,ET-1）诱导的人源心肌细胞（人源多能干细胞诱导分化心肌细胞,hiPS-CMs）心衰模型,检测人源心肌细胞BNP表达水平,发现YXS能改善BNP表达水平。以上结果表明YXS能够改善心衰大鼠的心功能。3采用了蛋白质组学技术方法,定量比较了 ET-1诱导的人源心肌细胞模型在不同干预条件下的蛋白质组特征,并富集生物学信号通路和关键作用蛋白,筛选出YXS干预心衰作用的潜在分子标志物为:利钠肽A（natriuretic peptide precursor A,NPPA）、心肌肌钙蛋白-3（troponin I type 3,cardiac,TNNI3）、半乳糖素-3（galectin-3,GAL-3）、热休克蛋白-70（heatshockprotein70,HSP70）、心型脂肪酸结合蛋白-3（muscle and heart-type fatty acid-binding protein 3,FABP3）、ATP-柠檬酸合成酶（ATP-citrate synthase,ACLY）、细胞骨架相关蛋白-5（Cytoskeleton-associated protein 5,CKAP5）。并通过ELISA方法,验证其在体内和体外心衰模型过程中的变化情况。结合网络药理学分析,构建YXS作用的分子靶标网络与其相应效应分子的关系图,提示YXS可能通过分子网络（BNP、TNNI3、GAL-3、FABP3和CKAP5）发挥干预心衰的作用。4基于网络药理学分析结果,利用依文思蓝检测海马组织血脑屏障通透性,并用Western Blot方法检测与血脑屏障通透性相关的蛋白ZO-1和AQP4表达情况,发现YXS能改善心衰导致海马血脑屏障异常;通过ELISA方法检测海马组织的炎性因子IL-1 beta、TNF-α和IL-6表达水平,发现YXS能改善心衰导致海马炎性因子的表达。利用网络药理学进一步分析YXS化学成分与分子靶标,富集得到过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR γ）信号通路,并利用Western Blot方法,验证了 YXS可能通过干预PPAR丫信号通路,减少海马组织炎性反应的机制,从而发挥改善心衰导致海马功能异常的作用。第二部分基于“中药-网络-效应”整合的小儿扶脾颗粒干预功能性消化不良研究基于建立的“中药网络-效应”整合模式,本课题将这一整合策略拓展应用到小儿扶脾颗粒（XEFP）的研究。1基于BATMAN-TCM数据库,提取了 XEFP相关的113个化学成分与相应的456个分子靶标。结合DAVID数据库和STRING数据库的分析,得到XEFP化学成分、分子靶标和疾病的网络关系,富集结果发现XEFP可能与功能性消化不良（functionaldyspepsia,FD）等疾病相关。通过中医理论、XEFP临床经验和生物信息学分析三个维度,本课题重点考察XEFP干预功能性消化不良的药效及其作用机制。2利用碘乙胺和隔夜禁食方法构建功能性消化不良大鼠模型,并进行药物干预3周,通过检测各组胃排空功能、血清中唾液淀粉酶、胃泌素和一氧化氮合成酶含量等指标,结果表明XEFP能够明显改善FD的症状。3在药效研究基础上,开展胃组织蛋白质组研究,共鉴定到4045个蛋白。利用网络药理学分析XEFP化学成分与分子靶标,富集到HTR3A和c-FOS两个关键靶标。结合Western Blot验证,发现XEFP可能通过调控HTR3A和c-FOS而发挥干预功能性消化不良作用。第三部分丹红注射液抗缺血性脑卒中关键转录因子靶标筛选及其作用研究本人于博士期间也开展了一部分其他的研究工作。本课题组基于“中药-网络-效应”整合策略,前期研究已获得了丹红注射液（DHI）抗缺血性脑卒中药效研究和蛋白质组数据,本研究目的是通过分子生物学实验,初步筛选DHI干预缺血性脑卒中的关键转录因子。1利用Western Blot和EMSA实验,筛选出了 DHI抗缺血性脑卒中的关键转录因子SATB1和POU3F1。结合文献信息,本研究重点研究转录因子SATB1。2通过生物信息学预测,提示SATB1可能存在相互作用的靶标有Bcl-2和IL-4;通过实时荧光PCR检测Bcl-2和IL-4,结果提示SATB1在缺血性脑卒中可能调控Bcl-2和IL-4发挥抗缺血性脑卒中的作用。综上所述,本课题通过对代表性中药方剂益心舒胶囊（YXS）和小儿扶脾颗粒（XEFP）的研究,基于“中药-网络-效应”的整合模式,解析成分群与分子网络关联,系统分析了其作用机制及临床应用特点。本研究创新点:1基于“中药-网络-效应”整合的研究模式,通过对YXS干预心衰作用机制的研究,揭示了 YXS可能通过分子靶标网络（BNP、TNNI3、GAL-3、FABP3和CKAP5）干预心衰。2发现YXS能改善心衰导致海马组织异常的作用,并揭示了其可能通过对PPARy信号通路的作用而发挥疗效。3明确了 XEFP干预功能性消化不良的作用,并发现XEFP可能通过HTR3A和c-FOS靶标发挥干预功能性消化不良作用。
岳永强[8]（2018）在《血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究》文中提出目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白（Angtiotensin Ⅱ type 1 receptor associated protein,ATRAP）对体外培养的血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscular cell,VSMC）凋亡的影响及相关机制;腺病毒过表达的ATRAP对颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用。从而丰富ATRAP抑制颈动脉内膜增生的作用机制,并为临床治疗颈动脉术后再狭窄提供新的治疗方向。方法:体外实验:1 VSMC的获得、培养与鉴定VSMC购自广州吉妮欧生物科技有限公司。取自大鼠胸主动脉段组织,酶消化法获得。在添加10%胎牛血清（FBS）的DMEM的培养基中常规培养,在leica倒置显微镜下观察细胞生长状态、汇合度等;用α-SM-actin鉴定VSMC细胞表型。2 TUNEL检测腺病毒过表达的ATRAP对VSMC凋亡的影响2.1构建ATRAP过表达腺病毒与对照病毒由汉恒生物科技（上海）有限公司构建ATRAP的腺病毒过表达载体并提供对照腺病毒。2.2 TUNEL测定ATRAP过表达对VSMC凋亡的影响VSMC培养至5-7代,汇合度达90%,胰酶消化后,接种至96孔板（1x105 cells/ml）,汇合度达50-70%时,转染Adv.ATRAP或Adv.GFP,24小时后更换为在添加0.1%FBS的高糖DMEM培养基中培养24小时以获得同步化,添加或不添加AngⅡ（100nM）继续培养24h,用原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay;TUNEL assay）测定VSMC凋亡的改变,在leica活细胞工作站测定细胞凋亡的比例。2.3 总RNA提取及荧光定量PCR测定凋亡相关基因mRNA表达的改变VSMC接种于6孔板,余处理同前述。用RNAisoplus试剂盒提取VSMC的总RNA,按照PrimeScriptTMRT Master Mix反转录试剂盒说明书反转录cDNA,并在Applied Biosystems QuantStudio（?）6 Flex上进行荧光定量PCR测定凋亡相关基因的mRNA表达改变。2.4 Western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白的表达RIPA和PI（20:1）提取VSMC总蛋白,并用western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白（caspase 3,caspase 8,caspase 9,bcl-2,bax等）的表达改变。3 ATRAP干扰对VSMC凋亡的影响3.1 ATRAP siRNA及阴性对照的构建由上海吉玛制药技术有限公司合成ATRAP siRNA并提供阴性对照。3.2 ATRAP siRNA干扰序列干扰效率的鉴定VSMC 接种于 6 孔板,汇合度达 70-90%时,用 LipofectamineTM RNAiMAX Transfection Reagent（InvitrogennTM）转染 ATRAP siRNA 及阴性对照至培养基,48小时后用Trizol法提取总RNA,应用荧光定量PCR方法检测各组干扰序列对ATRAP的干扰效率。3.3 western blot检测ATRAP干扰对凋亡相关基因蛋白表达的改变细胞处理同上,提取细胞总蛋白,利用western blot技术测定ATRAP、GFP、cleaved-cas8、cleaved-cas-3、bcl-2、bax 等的改变,以 GAPDH 作为内参。4 westen blot检测过表达的ATRAP对VSMC凋亡影响的机制研究4.1 ATRAP对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的作用VSMC接种至6孔板,汇合度达50-70%时,转染Adv.ATRAP或Adv.GFP,24小时后更换为含0.1%FBS的高糖DMEM培养基中培养24小时,添加AngⅡ（100nM）并在 0 min、30 min、45 min、60 min、2 h、4 h 提取磷酸化蛋白,并用 western blot方法检测p-Akt的改变。4.2 PTEN抑制剂影响ATRAP对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制按前述方法进行腺病毒转染后,在AngⅡ处理前4 h加入PTEN抑制剂bpv（200 nM）,然后加入或不加 Ang Ⅱ（100nM）并在 0 min、30 min、45 min、60 min、2 h、4 h提取磷酸化蛋白,并用western blot方法检测p-Akt的改变。4.3 PTEN抑制剂对ATRAP过表达引起的VSMC凋亡的作用TUNEL测定PTEN抑制剂对ATRAP过表达引起的VSMC凋亡的影响,并分别用荧光定量PCR和western blot方法检测凋亡相关基因的mRNA及蛋白水平改变。体内实验5观察腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的作用5.1大鼠颈动脉球囊损伤模型的构建及腺病毒的局部转染2F fogarty取栓导管损伤大鼠左侧颈总动脉,以2*10^9pfu的ATRAP过表达腺病毒或对照病毒局部孵育左颈总动脉30min。5.2腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生的影响在不同时间点（3天,7天,14天）处死大鼠并取左侧颈总动脉,分为两部分,一部分标本提取RNA检测ATRAP及凋亡相关基因的mRNA改变,另一部分标本用4%多聚甲醛固定后进行颈总动脉横截面血管弹力染色（Verhoeff-Van Gieson（VVG）染色）。6腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤处VSMC凋亡的影响Tunel/DAPI免疫荧光染色测定大鼠颈动脉球囊损伤处细胞凋亡的改变。结果:1 VSMC的获得、培养与鉴定倒置荧光纤维镜下可见细胞贴壁生长,单个细胞呈细长梭形,细胞生长致密处细胞平行排列成束,典型的“峰谷状”生长。用α-SM-actin染色后,通过倒置荧光显微镜观察,血管平滑肌细胞呈绿色荧光。2腺病毒过表达的ATRAP促进离体的大鼠VSMC凋亡2.1细胞处理腺病毒转染ATRAP至培养的VSMC24小时,更换0.1%FBS的DMEM培养基并加入Ang Ⅱ继续培养24小时后进行TUNEL染色发现,过表达的ATARP促进离体的VSMC凋亡,且与Ang Ⅱ刺激没有明显的相关性。Ang Ⅱ组:Adv.ATRAP组相比Adv.GFP 组,VSMC 凋亡率增高（11.50±1.66%比 1.13±0.27%,P<0.05）;无 AngⅡ 组:Adv.ATRAP 组相比 Adv.GFP 组,VSMC 凋亡率增高（13.17±0.48%比 1.20±0.17%,P<0.05）。2.2荧光定量PCR结果检测ATRAP及凋亡相关基因mRNA的表达结果显示,ATRAP过表达引起促凋亡基因bax表达明显上调,抑制凋亡基因bcl-2表达下调。2.3 Western blot检测ATRAP及凋亡相关蛋白的表达western blot结果显示,ATRAP与GFP未形成融合蛋白,cleaved-caspase 8,cleaved-caspase 3,bax蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达减低,而cleaved-caspase-9表达没有明显改变,表明ATRAP过表达可诱导VSMC促凋亡蛋白表达增加,且主要是通过死亡受体途径（外源性途径）促进VSMC凋亡。3 ATRAP干扰对VSMC凋亡的影响3.1 荧光定量PCR鉴定ATRAP干扰序列的干扰效果结果显示,325干扰序列组对ATRAP干扰效率高于其他两组,因此选用325干扰序列进行后续实验。3.2 westen blot检测凋亡相关蛋白的改变western blot 结果显示,ATRAP 干扰后,cleaved-caspase 8,cleaved-caspase 3,bax蛋白表达减低,bcl-2蛋白表达增高,表明ATRAP沉默后可抑制VSMC凋亡。4过表达的ATRAP促进VSMC凋亡的机制研究4.1 ATRAP抑制Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化在多个时间点（30 min、45 min、60 min、2 h、4 h）,Adv.ATRAP 组相比Adv.GFP组,p-Akt蛋白表达明显减低（P<0.05）,说明在VSMC中,ATRAP过表达抑制Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化。4.2 PTEN抑制剂可逆转ATRAP对Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化的抑制作用在多个时间点（30 min、45 min、60 min、2 h、4 h）,Adv.ATRAP+bpv 组相比Adv.ATRAP组,p-Akt蛋白表达明显增高（P<0.05）,说明在VSMC中,PTEN抑制剂可逆转ATRAP过表达对Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化的抑制。4.3 PTEN抑制剂可逆转ATRAP对VSMC凋亡的促进作用TUNEL结果显示,Adv.ATRAP+bpv组相比Adv.ATRAP组,VSMC凋亡明显减少,而与 Ang Ⅱ 存在无明显相关（Adv.ATRAP+Ang Ⅱ 组相比 Adv.ATRAP+Ang Ⅱ +bpv 组,11.50±1.66%比 1.81±0.19%,P<0.05;Adv.ATRAP 相比 Adv.ATRAP+bpv 组,13.17±0.48%比 1.45±0.15%,P<0.05）;mRNA 及蛋白表达也支持 PTEN 抑制剂逆转ATRAP对VSMC凋亡的促进作用。体内实验5腺病毒转染的ATRAP抑制大鼠颈动脉球囊损伤引起的内膜增生在球囊损伤并腺病毒孵育后3天,Adv.ATRAP转染组相比Adv.GFP转染组,大鼠左颈总动脉内膜增生没有明显差异;而在球囊损伤并腺病毒孵育后7天、14天后,Adv.ATRAP组相比Adv.GFP转染组,内膜面积及内膜中膜比（I/M）明显减少（P<0.05）。6腺病毒转染的ATRAP促进大鼠颈动脉球囊损伤处VSMC的凋亡TUNEL/DAPI免疫荧光染色结果表明,在球囊损伤并腺病毒孵育后3天,Adv.ATRAP转染组相比Adv.GFP转染组,大鼠左颈总动脉内膜处细胞凋亡没有明显差异;而在球囊损伤并腺病毒孵育后7天、14天后,Adv.ATRAP组相比Adv.GFP转染组,内膜处细胞凋亡率明显增高（P<0.05）。结论:1腺病毒过表达ATRAP促进离体大鼠VSMC的凋亡2腺病毒过表达的ATRAP抑制Ang Ⅱ刺激引起的Akt磷酸化3 PTEN抑制剂显着抑制了 ATRAP过表达诱导的离体大鼠VSMC的凋亡4 PTEN抑制剂可逆转ATRAP过表达对AngⅡ刺激引起的Akt磷酸化的抑制5 siRNA干扰ATRAP抑制VSMC凋亡6过表达ATRAP显着抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成7过表达ATRAP促进大鼠颈动脉球囊损伤处的细胞凋亡
梁英[9]（2017）在《高血压小血管重构的特征性改变及葡萄籽原花青素保护作用的机制研究》文中指出原发性高血压（Essential hypertension,EH）是以动脉血压持续升高为特点的"心血管综合征",也是最常见的慢性病之一,具有病程长、病因复杂、健康损害和社会危害严重等特点,是我国心脑血管病最主要的危险因素和原因,是全世界公认的重大公共卫生问题。高血压病主要的危害是针对重要脏器如心、脑、肾、血管的结构与功能,最终导致这些器靶官的功能衰竭,危及患者生命安全和生活质量,加重家庭和社会的负担,一直是心血管领域研究的热点之一。血管重构既是高血压病发生、发展的病理基础,又是靶器官受损的表现,对其进行干预是目前高血压病一级预防和二级预防的主要策略。血管重构（Vascular remodeling,VR）,其作为一个动态过程,不仅涵盖细胞的增殖、迁移、凋亡,还包括细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）成分的合成、降解及重排;同时又是血管对各种刺激因子的动态反应过程,包括信号的感知、传导和调节因子的合成、释放,最终血管结构改变出现。最典型的特征包括中膜增厚、内径缩小和基质增多,但不同的血管重构有不同变化,现认为大动脉血管如主动脉,以血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）肥大为主;小动脉如肠系膜第三级动脉,以增生为主。现阶段缺乏针对高血压小动脉重构机制及干预的系统性研究。大量血管重构研究侧重于血管内膜内皮细胞和VSMC,我们实验发现小动脉血管外膜的细胞成分:成纤维细胞（Adventitia fibroblast,AF）在炎症和细胞因子等病理刺激下通过激活、腔内迁移和表型转化参与并促进血管重构,使胶原蛋白过度合成、沉积于血管壁,具有不同于大动脉血管重构鲜明的特点;而血管壁细胞增殖和凋亡之间的平衡失调也是小动脉血管重构过程中的重要细胞事件。葡萄籽原花青素（Grape seed proanthocyanidins extracts,GSPE）是当今世界公认的清除自由基最有效的天然抗氧化剂。据报道GSPE能有效治疗多种心血管疾病,包括动脉粥样硬化、心肌再灌注损伤、高血压及其靶器官损害等,但对血管重构的作用,特别是对高血压小动脉重构影响及机制研究鲜有报道。本研究首先观察比较43周龄自发性高血压大鼠（Spontaneous hypertensive rat,SHR）主动脉大血管与肠系膜小动脉血管重构的不同特点,以小动脉重构异于大动脉的特征性改变—胶原增生为切入点,观察成纤维细胞增生、迁移及表型转化以及动脉重构时血管壁细胞凋亡和增殖的情况,从组织、细胞、分子多方面探讨小血管重构可能的机制并给予不同剂量GSPE长程干预,探讨GSPE对高血压小血管重构的保护机制,以期为研究高血压小血管重构提供新思路和新的药物作用靶点。第一部分自发性高血压大鼠大小血管重构的差异性比较研究背景流行病学资料证实,因经济迅速崛起导致的生活方式颠覆性地改变,使"生活方式病"发病率居高不下,其中高血压病就是最常见的代表性疾病之一。高血压病相关的心脑血管疾病,在我国已成为超过肿瘤的凶手,高血压病的靶器官损害以及不良预后对国民经济和人民健康造成难以估测的负担和损失,是心血管领域所面临的重大挑战。血管重构是多种危险因素及疾病的病理基础和靶器官损害。新近研究发现,动脉结构的异常改变是心血管事件的一项独立的预测因子。以增生肥厚为主要特点的高血压小血管重构,形态学特征为管壁明显增厚,管腔明显狭窄,与实验证据丰富的大动脉重构具有截然不同的特征性表现。现阶段针对高血压小动脉重构机制及干预的系统性研究较少。血管重构在发生血管管径的改变的同时会伴随血管壁成分的改变:血管壁细胞的增殖及活性改变、凋亡平衡失调及ECM合成、降解失衡以及分布异常等等。参与血管重构的AF所合成分泌的胶原蛋白,是构成ECM主要成分的一种非水溶性纤维蛋白,在维持组织器官结构中起决定性作用。血管壁胶原构成为Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原,当胶原的合成多于降解、特性构型及排列分布的变化是高血压血管胶原重构的根本原因。本实验以Wista Kyoto大鼠（Wista Kyoto rat,WKY）为正常血压对照组动物,以SHR为实验组,观察对比43周龄SHR主动脉及肠系膜小动脉血管重构的各自特征性变化,发现大动脉血管重构以血管壁细胞增生,尤其以血管平滑肌细胞肥大、增生为主;而小动脉以ECM增生为主,尤以外膜胶原增生明显,同时发现血管壁细胞凋亡增多可能涉及到血管壁细胞增生和凋亡的平衡情况,共同为高血压血管重构的防治提供了新的理论基础。研究目的1.比较43周龄WKY和SHR大鼠血压、体重及血脂、血糖、肾功能的情况。2.从形态学、组织、细胞多方面比较SHR主动脉与肠系膜小动脉血管重构的不同特点。3.从胶原增生的视角来论证高血压小血管重构的特征性改变。4.评价血管壁细胞凋亡与增生平衡情况在不同血管重构中的地位。研究方法20周龄雄性SHR大鼠30只,随机分为3组:模型对照组（SHR-C组）10只,GSPE小剂量干预组（SHR-L组）10只,GSPE大剂量干预组（SHR-H组）10只。同周龄雄性WKY大鼠（WKY-C组）10只,适应性饲养1周后进入实验。每天清晨WKY-C组和SHR-C组给予1ml 0.9%生理盐水灌胃,而GSPE干预组分别给予100ug/kg,250ug/kgGSPE 1ml灌胃。22周后用10%水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉动物,取血后迅速分离4组大鼠肠系膜小动脉及胸主动脉组织。实验第一部分比较WKY-C组和SHR-C组胸主动脉和肠系膜小动脉血管重构的差异,第二部分将探讨GSPE对小血管重构的保护作用及内在机制。1.实验期间每周尾套法测量大鼠尾动脉收缩压并称重;2.从腹主动脉抽血,离心后取血清进行总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯及血糖、肌酐、尿素氮的测定;3.留取WKY-C、SHR-C两组大鼠的肠系膜小动脉、主动脉组织,制作石蜡切片进行苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色观察比较大小动脉形态的变化、天狼猩红-维多利亚蓝染色检测胶原纤维增生和分布变化、以间接免疫荧光组织化学染色配合激光扫描共聚焦显微镜分析Ⅰ、Ⅲ胶原的分布和表达、透射电子显微镜观察两种动脉超微结构的变化、TUNEL法及免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）分别检测血管壁细胞凋亡与增生情况、TUNEL-PCNA双重染色显示血管壁细胞凋亡与增生平衡情况。并留取组织冻存于-80℃冰箱用于第二部分相关指标检测。研究结果1.血压和体重情况随着实验进行,SHR-C组收缩压显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）;而两组大鼠的体重变化无明显差异。2.血清血脂及血糖、血肌酐、尿素氮的情况实验测得两组大鼠的血清总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三脂及血糖、血肌酐、尿素氮均无显着性差异（P<0.05）。3.两组大鼠大小动脉形态学变化3.1HE染色WKY-C组大鼠肠系膜小动脉及主动脉形态正常,各层分界清楚,排列规整。SHR-C组大鼠肠系膜小动脉管壁增厚,管腔狭窄,中层VSMCs排列紊乱,外膜增厚明显且细胞增生;主动脉管壁增厚以中层增厚最为明显,VSMCs增生肥大,中层弹性膜排列紊乱、厚薄不均且断裂,部分内膜脱落。3.2天狼猩红-维多利亚蓝双染天狼猩红-维多利亚蓝双染明视野下观察,WKY-C组大鼠肠系膜小动脉与主动脉均形态正常,蓝绿色弹力板结构清晰,红色胶原纤维分布正常。SHR-C组肠系膜小动脉及主动脉管壁显着增厚,红色胶原纤维重度增生,其中肠系膜小动脉外膜胶原的增生更明显,其蓝绿色单层内弹力板无明显变化;而主动脉胶原增生以中层较明显,多层弹性纤维板破坏,结构紊乱。形态学检测分析显示,与WKY-C组相比,SHR-C组小动脉内径（Inner diameter,ID）、血管腔横截面积（luminal cross-sectional area,LCSA）明显减小（P<0.05）,血管壁厚度（wall thickness,WT）、血管壁横截面积（wall cross-sectional area,WCSA）、WT/ID、WCSA/LCSA明显增高（P<0.01）,差异有统计学意义;但主动脉 ID、LCSA、WT/ID 明显增大（P<0.05）,WT、WCSA、WCSA/LCSA 亦明显增高（P<0.01）,差异有统计学意义。4.两组大鼠大小动脉胶原纤维的比较Image pro-plus图像分析系统定量检测分析发现SHR-C组大鼠肠系膜小动脉、主动脉胶原面积百分比均显着高于WKY-C大鼠（P<0.01）,以小动脉增多更为明显。5.两组大鼠大小动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原分布天狼猩红-维多利亚蓝双染偏振光显微镜暗视野下可见:WKY-C组大鼠黄红色Ⅰ型胶原纤维主要分布于外膜;绿色Ⅲ型胶原主要分布在中膜及外膜。SHR-C组肠系膜小动脉及主动脉管壁胶原纤维明显增生,排列紊乱,Ⅰ型胶原纤维增生延及中膜,Ⅲ型胶原纤维则弥漫分布于外膜及以外,大小动脉相比,小动脉胶原增加更为显着,尤以外膜Ⅲ型胶原纤维明显;大动脉胶原增生主要分布在中膜,以Ⅰ型胶原为主。6.间接免疫荧光组织化学染色配合激光扫描共聚焦显微镜检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达WKY-C组大鼠动脉结构正常,可见正常密度的绿色胶原纤维及红色细胞核。与其相比,SHR-C组动脉管壁明显增厚,细胞核数目明显增多,Ⅰ、Ⅲ型胶原增多,弥漫分布于中膜及外膜。大小动脉相比,小动脉胶原增加最为明显,尤以外膜显着,大动脉血管壁细胞核增多明显,以中膜更为明显。荧光定量分析结果（IOD）显示:与WKY-C组比较,SHR-C组大血管壁（P<0.05）及小血管壁（P<0.01）Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均增多,差异有统计学意义,小血管Ⅲ型胶原增生更为明显。7.两组大鼠大小动脉超微结构变化透射电镜下WKY-C组大鼠动脉组织胶原多分布于血管外膜,少量分布于中膜,内皮细胞、VSMCs以及外膜的AF形态正常。SHR-C组血管内膜损伤明显,可见凋亡细胞;肠系膜小动脉中膜VSMCs增生、排列紊乱,外膜胶原纤维增生明显,伴有内质网扩张的成纤维细胞迁移至中膜,甚至迁移的AF出现表型转化特征:细胞膜下密斑形成;主动脉内皮细胞损伤尤为严重,部分脱落,基底膜呈虫蚀样增生修复,弹力层断裂,结构紊乱,VSMCs肥大增生,胞浆内细胞器增多,胶原增生主要存在于中膜,外膜AF变化不明显。8.TUNEL法检测凋亡细胞TUNEL法检测各组大鼠血管壁凋亡细胞,凋亡细胞的细胞核被染成棕黄色。与WKY-C组相比,SHR-C组大鼠肠系膜小动脉组织凋亡细胞明显增多,凋亡指数（apoptotic index,AI）明显增大（P<0.01）,而主动脉壁细胞凋亡AI亦有增多（P<0.05）,差异有统计学意义。9.免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）PCNA免疫组化染色结果显示:增殖状态的血管壁细胞核被染成棕黄色。与WKY-C组相比,SHR-C组大鼠大小动脉组织增殖细胞明显增多,其中肠系膜小动脉组织增殖指数（proliferation index,PI）增加（P<0.05）,主动脉组织PI增加更明显（P<0.01）,差异有统计学意义。10.TUNEL-PCNA双重染色TUNEL法检测凋亡细胞后再行免疫组织化学法检测PCNA阳性细胞,TUNEL标记的阳性表达为棕黄色,PCNA标记的阳性表达为紫色。图像形象显示高血压小动脉血管壁细胞凋亡阳性细胞和PCNA阳性细胞都明显增多,而小动脉血管壁细胞凋亡占优势、大动脉血管壁细胞增生趋势更明显。研究结论1.高血压小动脉存在胶原增生明显的血管重构,以外膜Ⅲ型胶原明显,伴AF的迁移及表型转化。2.高血压大血管重构血管壁细胞增生更明显,以中膜平滑肌细细增生为主,符合传统研究结果。3.高血压血管重构血管壁细胞增生和凋亡共同存在,但小动脉重构以非细胞成分-胶原增生占重要地位。提示高血压动脉血管重构是一个多因素、多种细胞、多种病变共同参与的动态病理过程,小血管重构存在不同于大血管重构的以胶原增生明显的特征性改变。第二部分葡萄籽原花青素对自发性高血压大鼠小血管重构的保护作用及机制研究研究背景高血压病及其并发症的发生发展和血管重构（VR）密切相关。单纯的"降压达标"并不能完全控制靶器官损害和并发症的发生,靶器官损害甚至可以发生在血压升高之前,提示高血压靶器官损害与血压水平相关性并不与早期的理论完全相符;因此探讨高血压血管重构机制及其防治,对保证病人的生命安全、提高人类的生存质量以及减轻国民经济的压力意义深远。研究表明:活性氧（Reactive oxygen species,ROS）诱导的氧化应激参与了高血压血管重构的各个环节,氧化应激（Oxidative Stress）水平增强贯穿高血压的发生发展。氧化应激涉及内皮功能障碍、炎症、增生、凋亡、迁移和纤维化,是高血压血管重构重要的触发、促进因素。GSPE是主要来源于葡萄籽、具有超强抗氧化活性的多酚类化合物,大量研究资料证实不仅在心血管领域呈现卓越的保护作用,如抗动脉硬化、降压、降脂,抗心肌缺血再灌注损伤及抗炎、保护血管内皮功能等;新近研究发现其抗肿瘤活性,对多种肿瘤细胞具有杀伤作用,但对高血压小血管重构影响及机制研究鲜有报道。本研究第一部分实验结果已发现胶原增生在小血管重构中的重要地位以及小血管壁细胞凋亡增多涉及到血管壁细胞增生和凋亡的失衡并参与小血管重构的发展。在第二部分对比自发性高血压大鼠模型对照组（SHR-C）及不同剂量GSPE干预组,检测各组动物血压、血脂、血糖、肾功及氧化应激水平的变化,并应用光镜、电镜等观察其对小血管重构形态学、组织学及细胞学的变化,TUNEL法和PCNA分别检测对血管壁细胞凋亡与增生情况的变化,探讨不同剂量GSPE对高血压小血管重构能否起到改善作用;进一步对胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及TGF-β1和凋亡相关蛋白BAX、Bcl-2表达进行RT-PCR和Western Blot检测,探讨GSPE对高血压小血管重构的保护作用及可能的机制。研究目的1.研究氧化应激水平与高血压小血管胶原增生重构的关系;2.证实不同剂量GSPE对高血压小血管胶原增生重构的保护作用;3.同时观察血管壁细胞增生和凋亡与GSPE的关系;4.从分子水平探讨GSPE改善高血压小血管重构的作用机制。研究方法实验第二部分实验动物的分组、饲养、给药及标本留取如前所述:30只20周龄雄性SHR大鼠适应性喂养1周后,随机分为:模型对照组（SHR-C组,n=10）,GSPE小剂量干预组（SHR-L组,n=10）,GSPE大剂量干预组（SHR-H组,n=10）。每天清晨SHR-C组给予1ml 0.9%生理盐水灌胃,而GSPE干预组分别给予100ug/kg,250ug/kg 1ml灌胃。22周后用水合氯醛麻醉动物后,取血后迅速分离各组大鼠肠系膜小动脉组织。1.实验期间每周尾套法测量尾动脉收缩压并称重;2.3组大鼠血样离心后取血清进行总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯及血糖、肌酐、尿素氮的测定;3.采用Victor1420多功能标记仪即Multilabel Counter测定全部4组大鼠肠系膜小动脉组织上清液活性氧簇（Reactive oxygen species,ROS）、过氧化氢（Hydrogen peroxide,H2O2）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）含量。4.留取3组大鼠的肠系膜小动脉组织,HE染色观察肠系膜小动脉形态、天狼猩红-维多利亚蓝染色检测胶原纤维和弹力纤维变化及Ⅰ、Ⅲ型胶原的分布、以间接免疫荧光组织化学染色配合激光扫描共聚焦显微镜分析Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达、通过透射电子显微镜观察3组大鼠肠系膜小动脉超微结构的变化、TUNEL法和PCNA分别检测对血管壁细胞凋亡与增生情况的影响。并留取组织冻存于-80℃冰箱,汇总实验第一部分组织标本进行RT-PCR和Western Blot检测。研究结果1.血压和体重情况在实验过程中,虽然收缩压随着实验进程逐渐升高,SHR-C组与两个GSPE干预组相比,组间收缩压差异没有统计学意义（P>0.05）;3组大鼠的体重变化无明显差异。2.血清血脂及血糖、血肌酐、尿素氮的情况实验测得3组间大鼠的血清总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三脂及血糖、血肌酐、尿素氮均无显着性差异（P>0.05）。3.检测4组大鼠肠系膜小动脉氧化应激指标与WKY-C组相比,SHR-C组肠系膜小动脉组织中ROS、H202、MDA含量显着升高,SOD、CAT活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;经GSPE干预后,SHR-H组 ROS（P<0.05）、H202 及 MDA（P<0.01）降低,SOD（P<0.01）、CAT（P<0.05）升高,差异有统计学意义;而SHR-L组仅ROS、H2O2含量明显下降（P<0.05）,且H202含量的下降在两干预组间也有统计学差异（P<0.01）,提示GSPE抑制氧化应激呈剂量依赖性趋势。4.大鼠肠系膜小动脉形态学变化4.1 HE染色显示:SHR-C组大鼠肠系膜小动脉呈明显血管重构征象:管壁增厚,管腔狭窄,平滑肌肥大增生,排列紊乱。SHR-L及SHR-H两组肠系膜血管重构征象有所改善,尤以SHR-H组明显,管壁厚度和管腔狭窄程度明显减轻,血管内膜较光滑,平滑肌增生,排列欠规则。4.2天狼猩红-维多利亚蓝双染明视野下观察:SHR-C组肠系膜小动脉壁显着增厚,管腔狭窄,蓝绿色单层内弹力板无明显增厚,管壁红色胶原纤维重度增生,主要分布于中膜及外膜;GSPE干预组有所改善:剂量依赖性地出现管壁变薄、管腔增大,血管壁胶原纤维增生减轻,尤以高剂量组（SHR-H组）明显。经过Olympus DP72光学显微镜进行图像采集,Image pro-plus图像分析系统进行定量检测分析显示:与SHR-C组相比,SHR-H 组 ID、LCSA 明显增大（P<0.05）,而 WT、WT/ID、WCSA、WCSA/LCSA 明显减小（P<0.01）,差异有统计学意义;SHR-L组仅WT、WT/ID、WCSA、WCSA/LCSA明显减小（P<0.01）,提示GSPE改善小血管重构形态学的剂量依赖性趋势。5.3组大鼠肠系膜小动脉胶原、弹力纤维的比较天狼猩红-维多利亚蓝双染明视野下观察,SHR-C组肠系膜小动脉管壁明显增厚,管腔内径减少,蓝绿色单层内弹力板有所增厚,中膜、外膜红色胶原纤维重度增生,且排列紊乱,甚至断裂;而GSPE干预组剂量依赖性地呈现管壁增厚减轻,管腔内径增大,蓝绿色单层弹力板变化不明显,血管壁红色胶原纤维减少,排列仍欠整齐,以高剂量组改善更明显,但蓝绿色单层弹力板变化不明显;Image pro-plus图像分析系统定量检测分析发现,GSPE干预后两组大鼠肠系膜小动脉胶原面积百分比显着低于SHR-C组大鼠（P<0.05）,弹性纤维面积百分比无统计学差异（P>0.05）,胶原纤维面积与弹性纤维面积比值SHR-L组（P<0.05）、SHR-H组（P<0.01）均增高;差异有统计学意义。6.大鼠肠系膜小动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原分布情况天狼猩红-维多利亚蓝双染偏振光显微镜暗视野下可见:SHR-C组肠系膜小动脉管壁胶原纤维明显增生、增粗,排列紊乱,黄红色增生的Ⅰ型胶原纤维主要分布在外膜并延及中膜,绿色Ⅲ型胶原纤维则弥漫分布于中膜、外膜及外缘;而GSPE干预组呈现剂量依赖性的血管壁胶原纤维增生减轻,尤以中膜和外膜Ⅲ型胶原纤维减少明显,中膜内Ⅰ型胶原也明显减少,胶原排列仍欠规整。7.间接免疫荧光组织化学染色配合激光扫描共聚焦显微镜检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达间接免疫荧光组织化学染色配合激光扫描共聚焦显微镜下可见:SHR-C组肠系膜小动脉管壁明显增厚,绿色胶原增生,红色细胞核数目增多,管腔狭窄,Ⅰ型胶原纤维增多,弥漫性分布于中膜及外膜,Ⅲ型胶原亦增多,主要分布于外膜及外缘;而GSPE干预组血管壁增厚减轻,细胞核数目减少,Ⅰ、Ⅲ型胶原均减少。荧光定量分析（iOD）结果显示:与SHR-C组比较,两GSPE干预组Ⅰ、Ⅲ胶原的表达均明显减少,差异有统计学意义（P<0.01）;SHR-H组较SHR-L组两种胶原表达减少更明显,组间有统计学差异（P<0.01）,呈现出剂量依赖性趋势。8.透射电镜观察3组肠系膜小动脉超微结构的变化电镜下观察到SHR-C组血管内膜损伤严重,部分脱落,并有凋亡细胞出现,同时发现富含扩大内质网的AF迁移至中膜并出现表型转化的特征:细胞膜下出现密斑,伴随中膜和外膜中大量胶原蛋白不规则增生,分布紊乱,AF内质网扩张,线粒体"空泡化"改变;GSPE干预组肠系膜小动脉内膜损伤减轻,胶原蛋白增生有所减轻,呈剂量依赖性的改善,SHR-L组中膜可见迁移细胞,外膜中可见内质网丰富的AF。9.TUNEL法检测凋亡细胞TUNEL法检测结果显示:各组大鼠血管壁凋亡细胞细胞核染成棕黄色。与SHR-C相比,仅SHR-H组大鼠肠系膜小动脉组织凋亡细胞明显减少,AI明显下降（P<0.01）,与SHR-L组间亦有统计学差异（P<0.01）,提示GSPE强大的抗凋亡能力及明显剂量依赖性趋势。10.免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原（PCNA）PCNA免疫组化染色结果显示:增殖状态的血管壁细胞核被染成棕黄色。与SHR-C组相比,仅SHR-H组大鼠肠系膜小动脉组织增殖细胞明显减少,PI明显下降（P<0.05）,差异有统计学意义。11.检测4组大鼠肠系膜小动脉TGF-β1和胶原蛋白Ⅰ/Ⅲ的mRNA及蛋白表达结果显示:与WKY-C组大鼠相比,SHR-C组大鼠肠系膜小动脉胶原蛋白Ⅰ（P<0.01）、胶原蛋白Ⅲ（P<0.05）及TGF-β1（P<0.01）mRNA表达均明显增加;而低剂量和高剂量的GSPE均可以拮抗这些作用,与SHR-C组相比,SHR-L组和SHR-H组胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及TGF-β1mRNA表达下降（P<0.05）,差异有统计学意义。4组大鼠血管壁胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ及TGF-β1蛋白的表达差异与mRNA一致,即SHR-C组大鼠肠系膜小动脉胶原蛋白Ⅰ,胶原蛋白Ⅲ及TGF-β1蛋白三种蛋白表达均高于WKT-C组（P<0.05）,差异有统计学意义;而低剂量和高剂量的GSPE均可以拮抗这些作用,与SHR-C组相比,SHR-L组和SHR-H组胶原蛋白Ⅰ（P<0.05）,胶原蛋白Ⅲ（SHR-L,P<0.05;SHR-H,P<0.01）、TGF-β1（SHR-L,P<0.05;SHR-H,P<0.01）蛋白表达下降,差异有统计学意义。证实高血压小动脉血管重构与TGF-β1增强相关的胶原蛋白严重增生明显相关,GSPE干预可明显降低TGF-β1蛋白的表达,改善胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ增生,从而改善小动脉血管重构。12.检测4组大鼠肠系膜小动脉Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达结果显示:与WKY-C组大鼠相比,SHR-C组大鼠肠系膜小动脉Bcl-2 mRNA表达明显降低（P<0.01）,BaxmRNA表达明显增加（P<0.05）,Bcl-2与Bax的比值明显降低（P<0.01）,差异有统计学意义;而低剂量和高剂量的GSPE均可以拮抗这些作用,与 SHR-C 组相比,SHR-L 组和 SHR-H 组 Bcl-2mRNA 表达增加（SHR-L,P<0.05;SHR-H,P<0.01）,SHR-H组Bax mRNA表达减少（P<0.05）、低剂量组和高剂量组Bcl-2 与 Bax mRNA 表达的比值（SHR-L,P<0.05;SHR-H,P<0.01）升高,差异有统计学意义。4组大鼠血管壁Bcl-2、Bax蛋白的表达差异与mRNA 一致:与WKY-C组相比,SHR-C组Bcl-2的蛋白表达减少（P<0.05）,Bax的表达增加不明显,但Bcl-2/Bax蛋白表达的比值降低（P<0.05）,差异有统计学意义;与SHR-C组相比,SHR-L组和SHR-H组均可以提高Bcl-2蛋白的表达（P<0.05）,SHR-H组可降低Bax蛋白的表达（P<0.05）,两组Bcl-2/Bax蛋白表达的比值也升高（P<0.05）,差异有统计学意义。证实高血压小动脉血管重构与高血压诱导小动脉细胞凋亡增多相关,低剂量和高剂量GSPE可以通过明显抑制细胞凋亡参与高血压大鼠小动脉血管重构。结论1.氧化应激水平增强与高血压小血管胶原重构密切相关,可能是其原因之一。2.GSPE具有独立于降压作用之外的保护高血压小血管重构的作用,并呈剂量依赖性趋势。3.GSPE改善高血压小动脉重构的作用与抑制氧化应激/TGF-β1信号通路有关,进而抑制AF激活、迁移、表型转化,达到抑制小血管壁胶原蛋白过度合成、沉积。4.GSPE还通过抑制氧化应激减轻高血压小动脉壁细胞凋亡,参与调节增殖/凋亡的平衡相关的小血管重构的改善。
杜蕊[10]（2017）在《真武汤对心力衰竭大鼠（心肾阳虚型）心功能影响及其作用机制探讨》文中指出目的:通过经方真武汤对心肾阳虚型心力衰竭大鼠心脏彩超左室短轴缩短率（FS）、射血分数（EF）测定,对大鼠血清脑钠肽（BNP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）及热休克蛋白70（HSP70）,心肌组织B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、沉默信息调节因子1（Sirt-1）蛋白表达的影响,以及心肌细胞超微结构的变化,探讨经方真武汤治疗心力衰竭可能的作用机制,为真武汤治疗心力衰竭提供科学客观的实验数据和理论依据。材料与方法:健康雄性Wistar大鼠80只,随机分成正常组即空白组10只,手术组70只。手术组70只大鼠通过结扎大鼠冠状动脉前降支配合冷水力竭式游泳复制心梗后心肾阳虚型心力衰竭大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分为中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、西药组和模型组五组,每组10只。正常组、模型组给予生理盐水灌胃,西药组给予卡托普利10mg/（kg·d）灌胃,中药低中高剂量组分别给予真武汤低剂量即相当于生药量9.45g/（kg·d）、中剂量相当于生药量18.9g/（kg·d）、高剂量相当于生药量37.8g/（kg·d）灌胃,六组每组均制成6ml液体,每日两次灌胃,每次3ml,持续15天。实验一通过彩色多普勒超声测量大鼠左室短轴缩短率（FS）、射血分数（EF）。用酶联免疫吸附试验法（ELISA）法测定大鼠血清脑钠肽（BNP）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、半乳糖凝集素-3（Galectin-3）、热休克蛋白70（HSP70）水平。实验二采用免疫印迹法（Western blotting）方法测定大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）及沉默信息调节因子1（Sirt-1）蛋白表达水平。实验三采用H-7650型电子显微镜观察大鼠心肌细胞超微结构变化。统计方法采用SPSS17.0统计软件进行数据统计分析,计量资料用均数±标准差（±s）表示,组间比较采用单因素方差分析,若方差不齐采用Dunnett检验,当P<0.05时为结果有显着差异的指标。结果:1.各组大鼠一般状态:正常组大鼠眼睛有神,反应灵敏,运动灵活,皮毛光泽、密实、紧贴身体,食欲正常,二便正常;模型组大鼠可见眼睛无神,精神萎靡,行动迟缓,活动耐力下降,背温下降,尾凉色暗,皮毛干枯、竖立、容易脱落,蜷卧缩肩,相互扎堆,足背水肿,体重下降,食欲不振,尿量减少,便溏等心肾阳虚型特征性表现;西药组和中药高剂量组大鼠一般状态接近于正常组;中药低剂量组和中剂量组大鼠一般状态介于中药高剂量组和模型组之间;饲养期间,中药各组大鼠均有不同程度尿量增加,其精神、皮毛、背温、饮食等一般状态与西药组比较差异不明显。说明真武汤能明显改善心力衰竭心肾阳虚型大鼠的一般状态。2.大鼠心脏FS、EF值:与正常组比较,模型组FS值与EF值均显着降低（P<0.01）,有统计学意义,说明模型组大鼠心功能受损,心力衰竭模型造模成功,与正常组比较,西药组、中药高剂量组FS值与EF值无明显差异（P>0.05）,无统计学意义;与模型组比较,西药组、中药高剂量组FS值与EF值显着升高（P<0.01）,有统计学意义,中药低剂量组、中药中剂量组FS值与EF值无明显差异（P>0.05）,无统计学意义;与西药组比较,中药各组FS值与EF值无明显差异（P>0.05）,无统计学意义。通过彩超测定大鼠心脏FS、EF值,说明真武汤可明显改善心力衰竭大鼠心功能,其疗效与卡托普利西药组无明显差异。3.血清脑钠肽BNP水平:与正常组比较,模型组BNP水平显着升高（P<0.01）,有统计学意义,说明大鼠心力衰竭模型造模成功,与正常组比较,西药组、中药低剂量组BNP水平明显升高（P<0.05）,有统计学意义,与正常组比较,中药中剂量组、高剂量组无明显差异（P>0.05）;与模型组比较,西药组和中药组BNP水平均降低,其中西药组、中药低剂量组BNP水平均明显降低（P<0.05）,有统计学意义,中药中剂量组、高剂量组BNP水平均显着降低（P<0.01）,有统计学意义;与西药组比较,中药高剂量组BNP水平明显降低（P<0.05）,有统计学意义,中药低剂量组、中剂量组BNP水平无明显差异（P>0.05）,无统计学意义。说明真武汤在一定程度上能够改善心力衰竭大鼠的心功能,真武汤高剂量组疗效明显优于卡托普利组。4.血清TNF-α、IL-6水平:与正常组比较,各组除中药高剂量组TNF-α及各组IL-6水平均升高（P<0.05、P<0.01）,有统计学意义;与模型组比较,西药组和中药组TNF-α水平均降低,其中西药组、中药低剂量组、中剂量组TNF-α水平均明显降低（P<0.05）,有统计学意义,中药高剂量组TNF-α水平显着降低（P<0.01）,有统计学意义,与模型组比较,中药中剂量组IL-6水平明显降低（P<0.05）,有统计学意义,中药高剂量组IL-6水平显着降低（P<0.01）,有统计学意义;与西药组比较,中药中剂量组和高剂量组TNF-α水平明显降低（P<0.05）,有统计学意义,与西药组比较,中药组IL-6水平无明显差异（P>0.05）,无统计学意义。说明TNF-α及IL-6水平与心衰程度相关,真武汤通过调控TNF-α及IL-6水平在一定程度上能够改善心力衰竭大鼠的心功能,其疗效优于或等同于卡托普利组。5.血清Galectin-3、HSP70水平:与正常组比较,各组Galectin-3水平均升高（P<0.05、P<0.01）,模型组HSP70水平显着升高（P<0.01）,有统计学意义,中药低剂量组、中剂量组HSP70水平明显升高（P<0.05）,有统计学意义;与模型组比较,西药组、中药中剂量组、高剂量组Galectin-3水平显着下降（P<0.01）,有统计学意义,中药低剂量组Galectin-3水平明显下降（P<0.05）,有统计学意义,西药组、中药高剂量组HSP70水平显着下降（P<0.01）,有统计学意义,中药低剂量组、中剂量组HSP70水平明显下降（P<0.05）,有统计学意义;与西药组比较,中药各组Galectin-3、HSP70水平无明显差异（P>0.05）,无统计学意义。说明Galectin-3、HSP70水平与心衰程度相关,真武汤或可通过调控Galectin-3、HSP70水平治疗心力衰竭有较好疗效,其疗效与卡托普利西药组无明显差异。6.心肌组织Bax、Bcl-2蛋白表达:与正常组比较,模型组Bax蛋白表达明显提高（P<0.05）,有统计学意义,模型组Bcl-2蛋白表达明显降低（P<0.05）,有统计学意义;与模型组比较,真武汤中、高剂量组及西药组大鼠心肌组织Bax蛋白表达均明显下降（P<0.05）,有统计学意义,真武汤低剂量组Bax蛋白表达与模型组比较无明显差异（P>0.05）,无统计学意义,与模型组比较,真武汤中、高剂量组及西药组大鼠心肌组织Bcl-2蛋白表达均明显升高（P<0.05）,有统计学意义,真武汤低剂量组Bcl-2蛋白表达与模型组比较无明显差异（P>0.05）,无统计学意义;与西药组比较,真武汤低、中、高剂量组Bax、Bcl-2蛋白表达无明显差异（P>0.05）,无统计学意义。说明心力衰竭大鼠Bax蛋白表现为高表达、Bcl-2蛋白表现为低表达,Bax、Bcl-2与心衰程度密切相关,真武汤可能通过调控Bax、Bcl-2蛋白表达改善大鼠心功能,从而治疗心力衰竭。7.心肌组织Caspase-3、Sirt-1蛋白表达:与正常组比较,模型组Caspase-3蛋白表达明显提高（P<0.05）,有统计学意义,模型组Sirt-1蛋白表达明显降低（P<0.05）,有统计学意义;与模型组比较,真武汤中剂量组及西药组大鼠心肌组织Caspase-3蛋白表达均明显降低（P<0.05）,有统计学意义,真武汤低、高剂量组Caspase-3蛋白表达与模型组比较无明显差异（P>0.05）,无统计学意义,与模型组比较,真武汤中剂量组及西药组大鼠心肌组织Sirt-1蛋白表达均明显升高（P<0.05）,有统计学意义,真武汤低、高剂量组Sirt-1蛋白表达与模型组比较无明显差异（P>0.05）,无统计学意义;与西药组比较,真武汤低、中、高剂量组Caspase-3、Sirt-1蛋白表达无明显差异（P>0.05）,无统计学意义。说明Caspase-3、Sirt-1与心衰程度相关,真武汤可能通过调控Caspase-3、Sirt-1蛋白表达改善心室重构,改善心功能。8.心肌细胞超微结构的变化:与空白组比较,模型组细胞核扩大,线粒体明显肿胀,部分呈空泡状,嵴变疏变短,方向不规则,肌丝断裂、溶解、排列紊乱,各带难以分辨,闰盘消失。与模型组比较,真武汤低中高剂量组和西药组心肌超微结构均有不同程度的改善,线粒体排列较为规则,呈圆形、椭圆形或长杆状,嵴清晰可见,肌丝排列整齐,各带较明显,盘较完整,以真武汤高剂量组最为显着。说明真武汤能明显改善心肌细胞超微结构,且真武汤高剂量组改善程度最为明显。结论:1.通过左冠状动脉前降支结扎术结合冷水力竭式游泳成功复制心梗后心力衰竭大鼠（心肾阳虚型）模型。2.真武汤能够明显改善心力衰竭心肾阳虚型大鼠的一般状态。3.真武汤能够明显提高心力衰竭大鼠心脏FS和EF值,降低心力衰竭大鼠血清BNP水平,改善心功能。4.真武汤能够明显降低心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6水平,从神经内分泌角度说明真武汤可能通过神经内分泌系统抑制炎症因子TNF-α/IL-6释放,改善心室重构,改善心功能。5.真武汤能够明显降低心力衰竭大鼠血清Galectin-3、HSP70水平,从心肌纤维化角度说明真武汤可能通过调控Galectin-3/HSP70水平,抑制心肌纤维化,保护心肌细胞,改善心室重构,从而治疗心力衰竭。6.真武汤能够明显降低大鼠心肌组织Bax蛋白表达,明显升高Bcl-2蛋白表达,明显降低Caspase-3蛋白表达,明显升高Sirt-1蛋白表达,从细胞凋亡角度说明真武汤可能通过调节凋亡相关基因蛋白、调控凋亡信号通路、抑制氧化应激等途径,抑制心肌细胞凋亡,改善心室重构,从而发挥心力衰竭治疗作用。7.从心肌细胞超微结构角度证实真武汤能够明显改善心力衰竭大鼠心肌细胞超微结构,改善心功能,从而治疗心力衰竭。
二、厄贝沙坦对大鼠血管平滑肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、厄贝沙坦对大鼠血管平滑肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
（1）绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 肾素-血管紧张素系统与绝经后高血压研究进展 |
| 1 绝经后高血压概述 |
| 2 肾素-血管紧张素系统概述 |
| 3 雌激素通过调节肾素-血管紧张素系统治疗绝经后高血压 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 补肾法治疗绝经后高血压的研究进展 |
| 1 中医对绝经后高血压的认识 |
| 2 补肾法治疗绝经后高血压的理论依据 |
| 3 补肾法治疗绝经后高血压的研究进展 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 补肾法联合降压药治疗绝经后及围绝经期高血压的系统评价和Meta分析 |
| 1 研究目的 |
| 2 资料与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 文献检索结果 |
| 3.2 纳入文献的一般特征 |
| 3.3 纳入文献的用药规律统计 |
| 3.4 纳入文献的质量评价 |
| 3.5 Meta分析结果 |
| 3.6 不良反应分析 |
| 3.7 发表偏倚检测 |
| 3.8 敏感性分析 |
| 3.9 亚组分析 |
| 3.10 试验序贯分析 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 绝经后高血压患者中医证型分布及动态血压特点研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究内容和研究方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 基线资料 |
| 3.2 高血压分级分布 |
| 3.3 中医证型分布 |
| 3.4 昼夜节律类型分布 |
| 3.5 不同绝经年限动态血压参数比较 |
| 3.6 年龄与动态血压参数的相关性 |
| 3.7 血压变异性相关因素的多元线性回归 |
| 4 讨论 |
| 5 研究结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 淫羊藿苷通过调节RAS对雌性去势SHR发挥血压保护作用 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 统计学方法 |
| 5 实验结果 |
| 5.1 一般情况 |
| 5.2 淫羊藿苷对大鼠体重的影响 |
| 5.3 淫羊藿苷对大鼠血压的影响 |
| 5.4 淫羊藿苷对大鼠心率的影响 |
| 5.5 淫羊藿苷对大鼠脏器系数的影响 |
| 5.6 淫羊藿苷对大鼠ACE1-AngⅡ-AT1R轴的影响 |
| 5.7 淫羊藿苷对大鼠ACE2-Ang(1-7) -MasR轴的影响 |
| 5.8 淫羊藿苷对大鼠E_2含量及GPR30蛋白表达的影响 |
| 5.9 淫羊藿苷对大鼠心肌组织ERK1/2通路的影响 |
| 6 讨论 |
| 6.1 淫羊藿苷对SHR大鼠血压的影响 |
| 6.2 SHR和WKY大鼠循环和心肌组织RAS组分存在差异 |
| 6.3 淫羊藿苷对SHR大鼠循环和心肌组织RAS组分的影响 |
| 6.4 淫羊藿苷对SHR大鼠E_2及其受体GPR30的影响 |
| 6.5 淫羊藿苷对SHR大鼠心肌组织ERK1/2通路的影响 |
| 7 研究结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）基于体内体外模型探讨冠心宁片抗心肌肥大的药效及其作用机制（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 心肌肥大概况 |
| 1.2 神经体液因子在心肌肥大中的作用 |
| 1.2.1 血管紧张素Ⅱ与心肌肥大 |
| 1.2.2 醛固酮与心肌肥大 |
| 1.2.3 内皮素与心肌肥大 |
| 1.2.4 儿茶酚胺类物质与心肌肥大 |
| 1.3 氧化应激在心肌肥大中的作用 |
| 1.4 ERK信号通路在心肌肥大中的作用 |
| 1.5 抗心肌肥大药物的应用与研发 |
| 1.5.1 β受体阻断药 |
| 1.5.2 肾素-血管紧张素-醛固酮系统抑制剂 |
| 1.5.3 强心苷 |
| 1.5.4 利尿药 |
| 1.5.5 血管扩张药 |
| 1.5.6 中药及其单体 |
| 1.6 冠心宁片(GXN) |
| 1.6.1 GXN的主要化学成分 |
| 1.6.2 GXN的扩血管作用 |
| 1.6.3 GXN的抗血栓作用 |
| 1.7 选题意义和研究内容 |
| 第二章 冠心宁片对自发性高血压大鼠心肌肥大的干预作用 |
| 2.1 实验材料和仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 试验药物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组 |
| 2.2.2 血压测定 |
| 2.2.3 超声心动图检测 |
| 2.2.4 心脏大体观察与心肌组织的病理学观察 |
| 2.2.5 心肌组织心肌肥大相关基因mRNA表达的检测 |
| 2.2.6 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 GXN对SHR大鼠血压和心功能的影响 |
| 2.3.2 GXN对SHR大鼠心室壁厚度和心脏系数的影响 |
| 2.3.3 GXN对SHR大鼠心脏病理和心肌细胞大小以及心肌纤维化的影响 |
| 2.3.4 GXN对SHR大鼠心肌肥大相关基因mRNA表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 冠心宁片对大鼠心肌细胞肥大模型的影响及机制研究 |
| 3.1 实验材料和仪器 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要仪器和设备 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 试验药物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 乳鼠原代心肌细胞的分离和培养 |
| 3.2.2 MTT法检测细胞活性 |
| 3.2.3 心肌细胞面积的测定 |
| 3.2.4 心肌细胞凋亡的测定 |
| 3.2.5 心肌细胞凋亡相关基因mRNA表达的检测 |
| 3.2.6 心肌细胞ERK信号通路及细胞凋亡相关蛋白表达的检测 |
| 3.2.7 统计学方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 GXN对心肌细胞增殖活力的影响 |
| 3.3.2 GXN对心肌细胞大小的影响 |
| 3.3.3 GXN对心肌细胞凋亡的影响 |
| 3.3.4 GXN对心肌细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 3.3.5 GXN对心肌细胞ERK信号通路及细胞凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
（3）益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤大鼠内皮功能影响与机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 心肌缺血再灌注损伤模型建立与益气搜风中药对模型大鼠内皮功能影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮炎症因子的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠血管内皮细胞凋亡的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 现代医学对心肌缺血再灌注损伤认识与研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医学对心肌缺血再灌注损伤的认识与研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）基于FGF23/CaMKⅡ信号通路探讨肾元颗粒对糖尿病肾病小鼠心肌损伤的干预作用及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 肾元颗粒对db/db小鼠肾脏的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 实验二 肾元颗粒对db/db小鼠心脏的影响 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 实验三 肾元颗粒通过抑制内质网应激改善db/db小鼠心肌损伤 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 实验四 肾元颗粒通过抑制FGF23/CaMKⅡ信号通路改善db/db小鼠心脏内质网应激 |
| 1 实验目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 实验小结 |
| 讨论 |
| 1 中西医对于糖尿病肾病的认识 |
| 2 糖尿病肾病伴发的心血管事件 |
| 3 现代医学的治疗 |
| 4 肾元颗粒的药物组成 |
| 5 肾元颗粒改善糖尿病肾病心肌损伤的作用及机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述1 |
| 参考文献 |
| 文献综述2 |
| 参考文献 |
| 学位攻读期间论文发表及课题参与情况 |
| 致谢 |
（5）厄贝沙坦对2型糖尿病肾病大鼠肾脏miR-93及其调控蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物造模及分组 |
| 2.2 一般资料和血、尿标本的收集 |
| 2.3 常规指标和尿蛋白的检测 |
| 2.4 肾组织的留取 |
| 2.5 肾脏组织学观察 |
| 2.6 qRT-PCR检测肾组织中miR-93 的表达 |
| 2.7 Western blot方法检肾组织VEGF蛋白 |
| 2.8 免疫组织化学法检测VEGF、FN、Col-IV蛋白 |
| 2.9 数据处理及统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠常规指标和尿蛋白的比较 |
| 3.2 HE染色病理结果 |
| 3.3 Masson染色病理结果 |
| 3.4 qRT-PCR结果 |
| 3.5 Western blot结果 |
| 3.6 免疫组化结果 |
| 第二部分 讨论 |
| 第三部分 结语 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间研究成果 |
（6）ERK1/2信号通路对衰老心肌缺血损伤的影响和调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 ERK1/2信号通路在衰老心肌缺血性损伤中的变化及意义 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象与分组 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 靶向激活ERK1/2信号通路对老龄小鼠心肌缺血性损伤的保护作用 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 ERK1/2信号通路调控衰老心肌细胞损伤的机制研究 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 研究对象与分组 |
| 1.2 主要仪器与试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 心肌细胞线粒体融合/分裂在心力衰竭中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（7）基于“中药-网络-效应”整合的益心舒胶囊作用解析及策略拓展应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 中药方剂复杂体系解析的现代研究方法综述 |
| 综述二 慢性心功能衰竭的研究进展 |
| 综述三 功能性消化不良研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 基于“中药-网络-效应”整合的益心舒胶囊干预心衰的作用解析研究 |
| 第一章 益心舒胶囊作用靶标和疾病的生物信息学分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 数据分析 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 益心舒胶囊干预心衰的药效研究 |
| 第一节 益心舒胶囊干预大鼠心衰模型的药效研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 益心舒胶囊干预人源心肌细胞心衰模型的药效研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 益心舒胶囊干预心衰关键靶标筛选与验证 |
| 第一节 益心舒胶囊干预心衰的关键靶标筛选 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 益心舒胶囊干预心衰关键靶标验证 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 益心舒胶囊干预心衰导致海马组织功能异常的药效研究及作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 基于“中药-网络-效应”整合的小儿扶脾颗粒干预功能性消化不良研究 |
| 第一章 小儿扶脾颗粒作用靶标和疾病的生物信息学分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 数据分析 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 小儿扶脾颗粒干预功能性消化不良的药效研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 小儿扶脾颗粒干预功能性消化不良关键靶标筛选及验证 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 丹红注射液抗缺血性脑卒中关键转录因子靶标筛选及作用研究 |
| 第一章 丹红注射液抗缺血性脑卒中关键转录因子靶标筛选 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二章 关键转录因子SATB1在缺血性脑卒中的作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 总结与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（8）血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词及中英文对照索引 |
| 引言 |
| 实验一: ATRAP过表达对体外培养的VSMC凋亡的作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 实验二: 腺病毒转染的ATRAP对大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜形成的作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肾素-血管紧张素系统与颈动脉术后再狭窄的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（9）高血压小血管重构的特征性改变及葡萄籽原花青素保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 自发性高血压大鼠大小血管重构的差异性比较 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 葡萄籽原花青素对自发性高血压大鼠小血管重构的保护作用及机制研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 创新点与局限性 |
| 致谢 |
| 在研期间发表的论文 |
| 参与科研工作情况 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文一 |
| 英文论文二 |
（10）真武汤对心力衰竭大鼠（心肾阳虚型）心功能影响及其作用机制探讨（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 真武汤对心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6、Galectin-3、HSP70水平的影响材料与方法 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 真武汤对心力衰竭大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Sirt-1蛋白表达的影响材料与方法 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 真武汤对心力衰竭大鼠心肌细胞超微结构的影响材料与方法 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 综述 |
| 综述一 慢性心力衰竭中医研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 慢性心力衰竭现代医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
四、厄贝沙坦对大鼠血管平滑肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡的影响（论文参考文献）
- [1]绝经后高血压患者中医证型分布特点及淫羊藿苷干预的相关机制研究[D]. 袁晶. 北京中医药大学, 2021(02)
- [2]基于体内体外模型探讨冠心宁片抗心肌肥大的药效及其作用机制[D]. 黄宇. 浙江大学, 2021(01)
- [3]益气搜风中药对心肌缺血再灌注损伤大鼠内皮功能影响与机制的研究[D]. 张雯雯. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [4]基于FGF23/CaMKⅡ信号通路探讨肾元颗粒对糖尿病肾病小鼠心肌损伤的干预作用及其机制[D]. 朱国双. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [5]厄贝沙坦对2型糖尿病肾病大鼠肾脏miR-93及其调控蛋白表达的影响[D]. 侯智敏. 甘肃中医药大学, 2020(12)
- [6]ERK1/2信号通路对衰老心肌缺血损伤的影响和调控机制研究[D]. 赵强. 新疆医科大学, 2019(02)
- [7]基于“中药-网络-效应”整合的益心舒胶囊作用解析及策略拓展应用[D]. 贤明华. 中国中医科学院, 2018(01)
- [8]血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白促进血管平滑肌细胞凋亡并抑制内膜增生的机制研究[D]. 岳永强. 郑州大学, 2018(12)
- [9]高血压小血管重构的特征性改变及葡萄籽原花青素保护作用的机制研究[D]. 梁英. 山东大学, 2017(08)
- [10]真武汤对心力衰竭大鼠（心肾阳虚型）心功能影响及其作用机制探讨[D]. 杜蕊. 辽宁中医药大学, 2017(05)